文档介绍：微生物快速检测与鉴定微生物论文学院:食品科学与工程学院班级:生工091学生:彭彩连学号:42号【关键词】 微生物快速检测随着人们生活水平不断提高,各种安全问题越来越受到人们重视,微生物污染问题也相应地备受关注。在食品与环境等各个方面都有微生物污染可能,一旦污染,微生物将大量繁殖而导致食源性疾病或环境污染甚至医院内感染。特别是近年来随着环境污染加剧与生态平衡不断破坏,导致感染致病菌种类越来越多,病原微生物对人类威胁越来越大。传统检验方法,主要包括形态检查与生化方法,其准确性、灵敏性均较高,但涉及实验较多、操作烦琐、需要时间较长、准备与收尾工作繁重,而且要有大量人员参与[1,2]。所以,迫切需要准确、省时、省力与省成本快速检验方法。本文对微生物快速检测方法进展情况及实际应用进行总结,以利于预防食源性疾病及公共卫生突发事件发生。   1 即用型纸片法    3M公司perrifilmTMPlate系列微生物测试片,可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌与酵母计数[3]。由RCPScientificInc公司开发上市Regdigel系列,除上述项目外还有检测乳杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌产品[4],这两个系列产品与传统检测方法之间相关性非常好。如用大肠菌群快检纸片检测餐具表面,操作简便、快速、省料,特异性与敏感性与发酵法符合率高,已经被列为国标方法。使用时应正确掌握操作技术与判断标准,从而达到理想检测效果[5]。美国3M公司生产PF(Petrifilm)试纸还加入了染色剂、显色剂,增强了菌落目视效果,而且避免了热琼脂法不适宜受损细菌恢复缺陷。霉菌快速检验纸片,应用于食品检验中霉菌具有操作简便,仅需36℃培养,不需要低温设备;快速,仅需2d就可观察结果,比现在国家标准检验方法缩短3~5d,大大提高了工作效率。纸片法与国标法在霉菌检出率上差异无统计学意义,且菌落典型,易判定。纸片荧光法利用细菌产生某些代谢酶或代谢产物特点而建立一种酶—底物反应法。只需检测时纸片可高压灭菌处理,4℃保存,简化了实验准备、操作与判断[6]。但由于它们价格昂贵,限制了在基层单位实际应用。   2 生物化学技术    PCR技术 PCR技术采用体外酶促反应合成特异性DN***段,再通过扩增产物来识别细菌。由于PCR灵敏度高,理论上可以检出一个细菌拷贝基因,因此在细菌检测中只需短时间增菌甚至不增菌,即可通过PCR进行筛选,节约了大量时间,但PCR技术也存在一些缺点:食物成分、增菌培养基成分与其他微生物DNA对Taq酶具有抑制作用,可能导致检验结果假阴性;操作过程要求严格,微量外源性DNA进入PCR后可以引起无限放大产生假阳性结果,扩增过程中有一定装配误差,会对结果产生影响。由于以上原因,PCR技术对操作者自身素质要求很高,对于基层单位而言难以做到。短时间内也不会有经济效益与社会效益,因此影响了这项技术在基层应用。    基因探针技术 基因探针技术利用具有同源性序列核酸单链在适当条件下互补形成稳定DNARNA或DNADNA链原理,采用高度特异性基因片段制备基因探针来识别细菌。基因探针优点是减少了基因片段长度多态性所需要剖析条带数。如法国生物一梅里埃公司GENPROBE基因探针检测系统,对于分离到单个菌落,30min完成微生物确证试验[7],基因探针缺点是不能鉴定目标菌以外其他菌。   3 选择、鉴定用培养基法    在培养基中加入特异性生化反应底物、抗体、荧光反应底物、酶反应底物等,可使目标培养物选择、分离、鉴定一次性完成。如生物一梅里埃公司BP+RPF(兔血浆+纤维蛋白原)培养基,可在24h内鉴定金黄色葡萄球菌[8]。Merk公司chromocultColiformAgar培养基上,大肠杆菌为墨绿色至紫色菌落,沙门菌为淡绿色至蓝绿色菌落。柠檬酸杆菌与克雷伯杆菌为橙红色至红色菌落,其他肠道菌为无色菌落[9]。这个方法对操作者要求不高,短期培训合格后即可上岗,从而取得一定经济效益与社会效益,应用前景十分广泛。  4 免疫学技术   免疫学技术通过抗原与抗体特异性结合反应,再辅以免疫放大技术来鉴别细菌。免疫方法优点是样品在进行选择性增菌后,不需分离,即可采用免疫技术进行筛选。由于免疫法有较高灵敏度,样品经增菌后可在较短时间内达到检出度,抗原与抗体结合反应可在很短时间内完成[10]。此技术对操作者要求也不高,是目前为止基层单位应用时间最长最为广泛一项快速检测技术。如采用免疫磁珠法可有效地收集、浓缩神奈川现象阳性副溶血性弧菌,可显著提高环境样品及食品中病原性副溶血性弧菌检出率[11]。胶体金免疫层析法能快速、灵敏检测金黄色葡萄球菌[12],应用胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原,可大大提高工作效率[13]。ATP生物发光法是近年发展较快一种用于食品生产加工设备