文档介绍：硕士学位论文 HMGB 1、RAGE表达的影响硕士研究生:付亮指导教师:蔡绍曦摘要研究背景所有多细胞有机体的生存都依赖于氧气的正常运输和剥用,在产生能量与生成潜在有毒氧化性物质之间保持平衡。高氧(hyperoxia)或缺氧(hypoxia) 时会产生大量活性氧(reactive oxygen species,ROS),若机体抗氧化系统(包括内源性抗氧化酶、摄入的天然抗氧化剂等)未能清除ROS,则发生氧化应激(oxidativestress)。氧化应激参与众多中毒性、感染性、炎症性、神经变性性及舯瘪性疾病lH。气道作为机体与癸界相通的最大系统,需要很好的调控局部炎症反应以清除外来有害物质,应对氧化应激并避免激活不必要的全身免疫反应。哮喘是一种慢性气道炎症疾病,是遗传因素与环境因素共同作用所导致的免疫失调【21。哮喘存在气道上皮细胞对氧化损伤易感性[31,【41。哮喘慢性炎症反应与氧化应激互为因果、相互促进,导致气道上皮细胞凋亡、脱落及气道重塑。一方面,饮食因素在此过程中具有重要地位,摄入天然抗氧化剂不足使得气道抗氧化能力降低,可能遴一步加重了哮喘进展瓯新的整合医学观念认为, 饮食调节作为李}充替代治疗措麓,在治疗哮喘中具有重要地位[61。徨尽管 vitC/vitE被证明具有抗氧化功能,但既往多个临床随机对照研究并未在哮喘患者身上取得明显疗效【7】。而新近研究发现,一些富含特定美挝德反应产物(maillard reaction products,MRPs)(如类黑精(melanoidins)、特定晚期糖基化终产物中文摘要(Advanced ,AGEs))的食物显示了安全有效的抗氧化功能【鄹。另一方腼,以N-乙酰半胱氨酸(,NAC)为代表的抗氧化治疗已进入临床,但其应用十分有限f9l。深入了解NAC作用机制及寻找其他有效抗氧化剂是十分有应用前景的研究课题。我们前期应用抑制消减杂交技术成功构建了哮喘发作与缓解癸周血嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)cDNA文库,初步筛选出56个差异表达基因,发现高迁移率族蛋白Bl(high mobility group proteinB1,HMGBI)基因表达井高【lo】。细胞核内HMGBl具有稳定核小体结构及调节基因转录作用【ll】,分泌至细胞外的HMGBl被认为是重要的细胞因子,发挥前炎症介质及促进组织修复因子的作用f12】,能启动并调节固有免疫及获得性免疫反应113]。氧化应激可诱导细胞释放HMGBl至细胞外瑟稍,新近研究更表明氧化应激可直接介导细胞核内HMGBl 空阀变构H弱。被氧化的HMGBl是谷胱甘肽(glutathione,GSH)还原系统的作用底物【l51,提示了NAC作为GSH的煎体物质,与HMGBl之闻的可能关系。 HMGBl的主要受体之一晚期糖基化终产物受体(receptor foradvanced glycation ,RAGE),是肺泡上皮细胞的生物学标志116】。以上资料提示, HMGBl、RAGE与肺部氧化应激相关性疾病(如哮喘)的关系十分密切,但目前尚未有哮喘与Hl涯GBl、RAGE关系及NAC对此影响的文献报道。目的在哮喘BALB/e小鼠模型,研究NAC等抗氧化剂对HMGB 1及其受体RAGE 表达的影响,以帮助理解氧化应激在哮喘的作用及抗氧化治疗的机制。方法、类黑精组、,每组4只。类黑精组按文献制备富含类黑精的面包皮并按比例加入小鼠饲料中; 。以正常饲料为对照,分别喂养15天。用RT-PCR法观察肺部HMGBl、RAGE mRNA水平变化。硕士学位论文 2.(1).8只雌性BALB/e小鼠随机分为对照组、NAC组,每组4只。NAC 组用NAC给小鼠灌胃。以正常饲料为对照,分别喂养15天。用RT-PCR法观察肺部HMGBl、RAGE mRNA水平变化。(2).15只雌性BALB/e小鼠随机分为设立对照组、哮喘组、哮喘+NAC 组,每组5只。制备OVA致小鼠哮喘模型,ld、7d致敏,14--28天隔尽~次激发。以盐水代替OVA作为对照组。NAC组在激发前一周开始每天给予NAC灌胃,灌胃l h后再行激发。观察肺部HMGBl、RAGEmRNA水平变化。用免疫组织化学法观察肺部炎症情况,观察肺组织切片HMGBl、RAGE分布及蛋白表达情况。结果l。对照组、类黑精组、本糖懒氨酸组}差l蛭G8l +0,10、 0。、0。874-0。05,各组之间比较F=0。789,P--0