文档介绍：ProteinASepharose4FF产品使用说明书——高IgG结合特异性高流速低蛋白A脱落产品特点特点结合特异性强,基团脱落少颗粒大小50-160μm基质4%的交联琼脂糖凝胶推荐流速50-300cm/h配基重组proteinA使用温度常温配基密度6mg重组蛋白A/mlpH范围3-10动态吸附载量60mg人IgG/ml保存温度+4~8℃蛋白A残留小于3ng蛋白A/mgIgG保存液体20%乙醇产品介绍ProteinAsepharose介质是经过我们公司长期开发,在公司生产的nativeproteinA的基础上精致而成。通过ProteinASepharose4FF,可分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。本产品相对同类产品具有如下优势:1、偶联条件温和,更好的保持了proteinA的构象,所以抗体载量高,同体积的介质,相同规模的纯化设备,相同体积介质,抗体的产量明显高于用同类产品,大大的降低了抗体药物生产成本。2、非常稳定,不易脱落,用其生产的抗体中proteinA的残留比同类产品的更少。3、公司的ProteinA以及ProteinAsepharose的生产都是在清洁车间生产,符合制药企业生产需求。4、公司生产的ProteinAsepharose使用寿命长,常规条件下能够重复使用100次以上。使用说明(1)缓冲液的准备:平衡缓冲液:纯化不同动物和不同亚型抗体时所用平衡缓冲液是不同的,部分参照如下:抗体种类平衡缓冲液成分人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b10mM磷酸盐缓冲液,150mMNaCl,、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG350mMTris-Cl,3MNaCl,-(2)样品的准备样品上柱前先用平衡缓冲液稀释5至10倍,从而确保样品液的成分和pH与平衡缓冲液相近。如果上样体积过大,可以采取调节上样液pH和盐浓度的方式,使样品的pH和电导与平衡液接近,使样品中的缓冲体系与平衡缓冲液相同。细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰,去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。。(3)操作步骤a)填料装柱后,用纯水流洗至少3个柱管体积,以冲掉乙醇,再用平衡缓冲液流洗至少5个柱管体积来平衡柱子。b)将样品上柱,上样流速控制在60cm/h。c)平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积,把UV洗至基线。d)洗脱缓冲液洗脱,收集洗脱峰,立即用中和缓冲液中和到中性。e)再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于+4-8℃保存。操作中如果没有在线的蛋白监测系统,洗脱峰时可以分阶段收集,最后根据测定结果合并活性部分。应用范例从人血浆中纯化IgG:图1为应用本公司产品分离人血浆中的IgG的分离纯化色谱图。SDS-PAGE电泳分析结果见图2。填料:ProteinASepharose4FF,装柱体积1mL;样品:人血浆,;平衡缓冲液:10mMPBS,;洗脱缓冲液:-HCL,;洗脱蛋白量::蛋白Marker;R泳道:人血浆;1泳道:洗脱人IgG图2SDS-PAGE电泳结果分析表1ProteinA对不同物种抗