文档介绍：拟南芥G蛋白信号转导调节蛋白(At_RGSl)、 拟南芥G蛋白信号转导调节蛋白(AtRGSl)N一末端、:董婷导师:梁建生教授摘要本研究以拟南芥野生型Col—O、突变体rgsl-2、过表达35S:RGSl-N,35S:RGSJ,C为材料,通过突变体分析、转基因植株构建等技术,用分子生物学、生物化学等方法研究了 AtRGSl蛋白N一末端、C一末端结构域在拟南芥葡萄糖和ABA信号转导途径中的作用。取得了以下主要研究结果: 1、采用TOPO克隆的方法构建了35S:RGSl-N,35S:RGSl一C过表达转基因植株。克隆了AtRGSl基因N一末端、C一末端eDNA,通过TOPO克隆构建了CaMV 35S为启动子,GFP为报告基因,含有融合基因35S:RGSl-N-GFP、35S:-GFP的植物表达载体。利用根癌农杆菌浸染转化法将35S:RGSl-N-GFP、35S:RGSl一C-GFP融合基因导入突变体rgsl-2植株,‘经过抗生素筛选、根部荧光观察和觎P基因PCR鉴定,获得了转化成功的阳性植株。 2、、C一末端结构域在拟南芥葡萄糖和 ABA信号转导途径中的作用及其调节机理。结果表明: (1)rgsl-2种子萌发对葡萄糖的抑制作用不敏感,而35S:RGSl-N,35S:,其中35S:RGSl-N种子最敏感。四基因型种子萌发对甘露糖的抑制作用未表现出差异。表明这种抑制作用与糖的渗透胁迫无关,而是由葡萄糖介导的信号转导途径引起的。己糖激酶抑制剂NAG处理削弱了甘露糖对种子萌发的抑制效应,而对葡萄糖抑制萌发没有影响,表明葡萄糖抑制种子萌发不依赖于已糖激酶途径。(2)rgsl-2种子萌发对ABA低敏,而35S:RGSl-N,35S:RGSl,C种子表现为超敏感, 其中35S:RGSl-N种子最敏感。表明过表达AtRGSI-N,,增加了种子对ABA的敏感性。(3)葡萄糖与ABA共处理结果显示葡萄糖与ABA对种子萌发的抑制作用存在叠加效应。Fluridone与葡萄糖共处理结果显示Fluridone能降低葡萄糖抑制种子萌发的效应。表明葡萄糖是通过增加内源ABA含量来抑制萌发的。(4)rgsl,2幼苗主根显著长于Coi,而35S:RGSl-N,35S:RGSl一C主根显著短于Col、扬州大学硕士论文 rgsl-2。rgsl-2、35S:RGSl-N和35S:RGSl一C主根生长对葡萄糖和ABA的应答表现出相同趋势,,其次是35S:RGSl,C,35S:RGSl-N敏感性最高。表明AtRGSI 基因突变和过表达改变了代谢糖和ABA调节作用的敏感性。(5)植株水平,,而35S:RGSl-N,35S:RGSI—C 显著低于Coi。表明过表达AtRGSl-N、,增强耐旱性。(6)干旱胁迫条件下,rgsl,2水势显著低于Col,而35S:RGSl-_IV,35S:、rgsl-2。表明rgsl-2保水能力较弱,而35S:RGSl-N,35S:RGSl。C具有较强的保水能力,在干旱胁迫下能够保持较高的叶片水势。相应地,Col、rgsl-2叶片ABA含量较低,而转基因株系35S:RGSl-N,35S:RGSJ—C叶片ABA含量显著高于Col、rgsl。2。表明过表达AtP,.GSlN一末端、。关键词:拟南芥,,结构域,突变体,脱落酸,糖,转基因植株拟南芥G蛋白信号转导调节蛋白(AtRGSl)、 Functional Analyses ofN--terminal Domain and C·-terminal Domain ofRegulator ofGprotein Signaling(RGS)Protein inGlucose and ABA Signaling inArabidopsis ThaHana Postgraduate:Ting Dong Supervisor: Liang ABSTRACT The regulator ofG—proteinsignaling(RGS)proteins,recently identifiedinArabidopsis thaliana (named asAtRGS 1),h