文档介绍：化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其发光机理是:反应体系中的某些物质分子,如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能景而由基态跃迁到激发态,当中问体由激发态mi到基态时会释放等能级的光了,对光了进行测定而实现定量分析。化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物,因化学发光具有荧光的特异性,但与荧光产生需要激发光不同,化学发光由化学反应产生光强度,并不需要激发光,从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上,经过抗原与抗体特异性反应形成抗原一抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结束后,加入氧化剂或酶的发光底物,化学发光物质经氧化剂的氧化后,形成一个处于激发态的中间体,会发射光了释放能量以IE到稳定的基态,发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。一、化学发光免疫分析方法的类别化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为3大类,即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。(一)化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。目前常见的标记物主要为鲁米诺类和”丫|庞酯类化学发光剂。。鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。在碱性溶液中,鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光,其中H2O2最为常用。因发光反应速度较慢,需添加某些酶类或无机催化剂。酶类主要是辣根过氧化物酶(HRP),无机类包括03、卤素及Fe3+、Cu2+、Co2+和它们的配合物。鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下,被H2O2等氧化剂氧化成3一氨基邻苯二酸的激发态中间体,当其I叫到基态时发出光子。,。丫嚏酯用于化学发光免疫分析方法(Chemiluminescentlmmunoassay,CLIA)由于热稳定性不是很好,Klee等研究合成了更稳定的叶I定酯衍生物。在含有H2O2的碱性条件下,叩陇酯类化合物能生成一个有张力的不稳定的二氧乙烷,此二氧乙烷分解为C02和电了激发态的N—***吗陇***,当其回到基态时发出一最大波长为430nm的光子。叩陇酯类化合物量了产率很高,。叩1定酯作为标记物用于免疫分析,发光体系简单、快速,不需要加入催化剂,且标记效率高,木底低。叩I定酯或叩嚏磺酰***类化合物应用于CLIA,通常采用HNO3+H2O2和NaOH作为发光启动试剂,有些在发光启动试剂中加入TritonX-100,CTAC,Tween-20等表面活性剂以增强发光。(二)化学发光酶免疫分析化学发光酶免疫分析(ChemiluminescentEnzymeImmunoassay,CLEIA)是以酶标记生物活性物质进行免疫反应,免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光,用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为魏根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸前(ALP),它们有各自的发光底物。HRP最常用发光底物是鲁米诺及其衍生物。在CLEIA中,使用过氧化物酶标记抗体,进行免疫反应后,利用鲁米诺作为发光底物,在过氧化物酶和起动发光试剂(NaOH和H