文档介绍：塑区煅猁一一教一教理一一病一承一世一叔毒一来一勃一文胍种萍恋纳秆『蚑饔没频难芯专名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员张洪泉教授周元平教授邓诣群教授周国春教授张奉学教授曾耀英教授罗健东教授江仁望教授抗一夏~姜一刘论文评阅人年广州业南方医科大学级博士学位论文·课题来源:
胍种萍恋纳秆『蚑饔没的研究博士研究生:夏承来指导教师:姜世勃教授刘叔文教授摘要研究背景艾滋病是由人免疫缺陷病毒腥疽鸬模壳霸谌蛞殉爆发性流行趋势。据年/谋ǜ妫蚬灿騂感染者,其中蛭P路⒏腥荆磕暧万人死于相关疾病。我国现有艾滋病病毒感染者约万人,其中艾滋病病人蚶T谠颇稀⒑幽稀⑿陆臀颐广东等省份,腥疽殉鱿指吡餍星魇啤8菔澜缥郎橹臣疲壳拔夜滋病病毒感染者占总人口的比例虽然很低,但感染人数在亚洲位居第二位,在全球居第十四位。如果防治措施不力,将对我国的人口健康和经济社会发展产生巨大的影响。艾滋病防治最好的手段应是疫苗。但二十多年来,还没有一个呙绲临床方案被证明为有效。在今后相当长的一段时期内,有效的呙缈帜延重大突破。因此,发展安全有效的抗艾滋病药物,依然是当前艾滋病预防和治疗的重点。迄今为止,已有三大类种抗┪锉幻拦鶩批准用于临床,分别是逆转录酶抑制剂,蛋白酶抑制剂和胍种萍痢G傲嚼嘁┪镆子盏糎耐药性突变,而且对人体有较大的毒副作用,导致越来越多的艾滋病患者无法持续地接受抗┪锏闹瘟啤6鳫进入抑制剂,尽管目前仅有和街郑们对耐受前两类抗┪锏牟《疽廊挥行В⒖勺槌筛嗟摹凹ξ簿方案,用于艾滋病的治疗。因此,开发新的阻止病毒进入的第三类抗┪镆丫晌博士学位论文
验室内进行,不便于广泛深入的开展研究,所以建立适用于普通实验室筛选卜目前抗艾滋病药物研究的热点。高通量药物筛选是当前新药发现的手段之一。自从世纪年代确现第一个来┒酥馗葱蛄械腍一胍种萍烈岳矗臼笛槭以立了一系列筛选胍种萍恋姆椒ǎ⑶也捎谜庑┓椒ǚ⑾至艘幌盗邪邢猯的融合抑制剂和靶向—的粘附抑制剂。但是,由于病毒具有传染性强、致病性高等特点,对该病毒只限于在生物安全级别三级实进入抑制剂高通量药物筛选的方法,对于开发抗卜乱┫缘糜任V匾!肽类药物分子量大菀妆荒谠葱缘鞍酌附到猓荒芸服,只能注射,而且用量大看蝜,危,合成步骤多,成本高,药品费用太昂贵万美元/人/年R虼耍罢倚》肿踊衔锎鎀荋进入抑制剂研究的方向。我们课题组此前的研究表明,的作用机制和⒉幌嗤荒苡隢一多肽形成六螺旋束结构,也不能阻止隢嚯男纬闪菪峁梗赡芫有多个功能区。但是它具体的作用机制并不清楚。通过全序列多肽扫描,我们曾发现衍生至病毒株母ㄖ芴褰岷喜课缓蚲缒で蔚多肽,能消除囊种苹钚裕砻鱐一抗淖饔梦坏慊拱╣上的ㄖ芴褰岷喜课弧D荰雊的岷衔坏阆嗷プ饔玫墓丶序列是什么欠衲芙岷系絞复合物上的辅助受体结合位点钊胙芯縏一的新作用机制,将可能为胍种萍恋难芯刻峁┬碌囊┪作用靶点。为此,本课题根据我们在《窘胍种萍裂芯苛煊蚧鄣木椋俨《咀魑Q芯慷韵螅H啡螲一胍种萍列碌囊┪镒饔冒械阋约敖相应的高通量筛选方法,寻找替代多肽药物的小分子化合物奠定研究基础。⒁恢址歉腥拘缘南赴诤系姆椒ǎ焊荼臼笛槭一鄣慕⒎歉腥拘中文摘要
高通量筛选方法的经验,分别用细胞和一疊—魑Pвξ锖靶细胞,通过对话肴樘歉拭溉旧ɡ磁卸舷赴诤系男ЧS捎诒痉椒ň哂蟹歉染性,再结合基于细胞融合的非感染性的方法,可以在普通实验室用来快速筛选诤弦种萍梁蚑蛋白抑制剂。烊焕丛吹目笻药物筛选:利用假病毒体系和针对包膜蛋白亚基的椒ǎ岷戏肿佣越樱舛岳源于马尾树树皮的化合物蜡果杨梅酸⑷毡旧咻缘厣系叵虏糠值钠咸烟抢嗷物和白桦酯酸衍生物等活性化合物抗的作用机理。雊的关系的研究:拟合成覆盖騈多肽扛龆嚯南喔个氨基酸残基罢蚁齌一抑制活性的关键序列以及与相互作用的关键序列。并且建立俨《,并筛选小分子化合物库,寻找能有效抑入靶细胞的活性分子,为开发病毒进入抑制剂类抗┪锾峁┬碌乃悸贰目的:⒏軭进入和复制的两个关键步骤,即病毒包膜蛋白介导的病毒一细胞膜融合和狶的相互作用,拟建立一种非感染性的细胞融合的方法来同时快速筛选融合抑制剂和狶抑制剂。⒔假病毒细胞筛选模型,以及俨《,并筛选小分子化合物库,寻找能有效抑制入靶细胞的活性分子,研究活性小分子化合物的具体作用机制。⑸钊胙芯縏一的具体作用机制,寻找胍种萍列碌囊┪镒饔冒械恪方法:⒎直鹩肏/赴虷籐/猤作为效应物和靶细胞。当细胞和一疊—赴岷虾螅琀/械腡蛋白可以启动半乳糖甘酶长末端的谋泶铮徊降贾铝薆肴樘歉拭傅谋泶铩R虼博士学位论文Ⅱ
细胞后,可分别获得鲫俨《竞蛌假病毒。可以通过对半乳糖甘酶染色来判断细胞融合的效果。⒔⑾赴降腍假病毒活性检测方法:将包膜蛋白质粒或与,ü馑孛副ǜ婊虻腍基因沧H局⒖笻活性筛选: