文档介绍：佛手中活性成分提取分离
及其体外活性测试研究

重庆大学硕士学位论文
(学术学位)

学生姓名:李文娟
指导教师:徐溢教授
专业:药物化学
学科门类:理学

重庆大学化学化工学院学院
二 O 一三年五月
Extraction and Separation of Effective
Components from Bergamot and Their
Biological Activities Study in vitro

A Thesis Submitted to Chongqing University
in Partial Fulfillment of the Requirement for the
Master’s Degree of Science
By
Li Wenjuan

Supervised by Prof. Xu Yi
Specialty: Medicinal Chemistry

College of Chemistry and Chemical Engineering of
Chongqing University, Chongqing, China
May, 2013
中文摘要

摘要

佛手是芸香科植物香橼的干燥果实,主要含有挥发油、香豆素类、黄酮类、
多糖等化学成分,具有抗肿瘤、调节免疫、抗炎、抗氧化等药理作用,作为重庆
的一种道地药材具有较高研究价值。当前,对佛手植物的开发利用大多停留在其
挥发油成分方面,而对佛手中大量的其他活性成分及其相应的生物活性研究却较
少。据此,本文在综述佛手药材相关研究进展的基础上,对佛手的活性化学成分
及生物活性进行研究,为深入开发利用佛手资源提供科学依据。
本文的主要研究工作及成果包括:
1. 采用溶剂提取法对佛手进行了系统分离和鉴定。以 60%乙醇溶液为溶剂对
佛手进行提取后,采用有机溶剂萃取,重点对石油醚、乙酸乙酯萃取层进行系统
分离,然后利用柱层析、重结晶、制备薄层色谱等方法进行分离纯化,依照理化
性质和与标准核磁图谱的对照,鉴定出了五种单体化合物,即:柠檬油素、滨蒿
内酯、伞形花内酯、佛手柑内酯和胡萝卜苷,为后续的抗肿瘤活性成分的筛选及
测试提供供试品。
2. 采用单因素实验与正交优化法对佛手多糖的水提工艺进行优化,确定提取
佛手多糖的最佳参数为:提取温度 90℃、料液比 1:15、提取时间 2h、提取次数 3
次。通过苯酚-硫酸法对佛手粗多糖中的总多糖的含量进行测定,测得佛手中总多
糖在粗多糖中含量为 %。采用逐级醇沉法对佛手多糖类成分进行初步分离,
逐级醇沉得三种粗多糖(FSP-1、FSP-2 和 FSP-3),得率分别为 %、%、%,
作为此后的抗氧化活性测试物。此外,采用 DEAE 纤维素柱层析法对佛手粗多糖
FSP-1 进行了分离纯化,得到 2 种纯多糖(BP-1、BP-2),BP-1 和 BP-2 水解后,
经 TLC 分析,发现其单糖成分均为葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖。
3. 采用体外细胞毒性测试实验,对分离得到的四种香豆素类成分(柠檬油素、
滨蒿内酯、伞形花内酯、佛手柑内酯)和佛手粗多糖的体外抗肿瘤作用效果进行
了测试。通过 96 孔板培养-荧光检测分析,测试了上述四种香豆素类成分和佛手多
糖的体外抗肿瘤作用,结合倒置显微镜观测了上述分离产物对细胞形态的影响。
研究显示,柠檬油素、滨蒿内酯和佛手柑内酯对 143B 人骨肉瘤细胞的生长有明显
的抑制作用,显微镜观测柠檬油素、滨蒿内酯和佛手柑内酯三种活性成分对肿瘤
细胞生长情况的影响,也显示出其对肿瘤细胞增殖具有抑制作用。

活性评价方法。该方法根据系统化学发光被抑制的程度,评价佛手多糖对活性氧
自由基的体外的清除能力。实验通过优化化学发光体系实验参数,测试得到三种
I
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粗多糖(FSP-1、FSP-2 和 FSP-3)的体外抗氧化活性数据。结果表明上述三种粗
多糖对羟基自由基、超氧根离子自由基和过氧化氢具有一定的清除作用,对羟基
自由基的清除能力较强,对过氧化氢的清除能力相对较弱,且 FSP-3 对三种自由
基的清除作用均为最大。结果表明,佛手多糖可作为潜在的具有抗氧化活性的天
然药物,具有较高的研究价值。

关键词:佛手;香豆素;多糖提取分离;抗肿瘤;抗氧化

本论文由国