文档介绍：河北医科大学硕士学位论文双苯***嗪对谷氨酸所致海马神经元损伤的保护作用姓名:吴洋申请学位级别:硕士专业:药理学指导教师:张永健 20050301 中文摘要双苯氮嚓对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用摘要双苯***嗦(Dipfluzine, Dip)系由河北医科大学首创合成的呱嗓类钙拮抗剂。Dip具有良好的脂溶性,可透过血- 脑屏障,可以选择性扩张脑血管、增加脑血流、改善脑微循环及脑缺血能量代谢、对亚***钠和戊巴比妥钠造成的小鼠学****记忆障碍有改善作用。从这些研究结果中可以看出, Dip有可能是一个很好的脑保护剂。为了进一步研究Dip的脑保护作用,本试验采用谷氨酸(Glu )制备模型来加以研究,并观察它对海马神经元的影响。旨在研究Dip是否可以对抗谷氨酸所致海马神经元损伤,如存在此作用,则进一步探讨其保护作用是否与其对细胞内钙离子浓度的影响有关。 1. Dip对谷氨酸致体外培养海马神经元损伤的保护作用目的:原代培养海马神经元,选择适于实验的神经细胞;制备谷氨酸损伤模型并筛选出用于制备损伤模型的最佳浓度;研究Dip对谷氨酸致体外培养海马神经元损伤的保护作用。方法:采用新生24小时内的仔鼠,剥离其海马组织, 通过消化、冲洗、悬浮,制备成细胞悬液,于24孔及% 孔培养板中培养。选择适于实验的神经细胞。将三种不同浓度的谷氨酸钠(. , lmmol/L)与培养 7天的海马神经细胞共同孵育l Omin,弃去上清,以HEPES 缓冲液(in millimoles) NaCl 100, KCl , , MgS04 ,. NaH,P04 , NaHC03 , HEPES , glucose ,换NEUROBASAL-A Medium (NBM)培养24h后, 采用MT'I,法测定海马神经元存活率,选择其中能明显引起海马神经元损伤的浓度作为制备模型的浓度。在损伤模型中加入小、中、大三种不同浓度的Dip ( 11 mol几、111 mol几、 1011 mol/L ),与海马神经元共同孵育24h。采用乳酸脱氢酶试剂盒测定海马神经元乳酸脱氢酶(LDH)泄漏率,用以表明损伤程度的变化,采用MTT法测定吸光度,用以表明海马神经元存活率的变化。结果:海马神经元在前3d生长迅猛,3-14d达到稳定生长期,选择7-8d的海马神经细胞用于实验。给予谷氨酸钠后可造成海马神经元的损伤, mmol/L 谷氨酸钠组、 mmol/L谷氨酸钠组海马神经元吸光度((. . )均较空白对照组()明显降低(p<)0 lmmol/ (p<)。故我们选用 1 mmol/1谷氨酸钠作为制备模型的浓度。损伤后给予不同浓度Dip后可减轻谷氨酸所致海马神经元损伤,MTT法测定吸光度,,显著低于空白对照组 (p<), (p<) 明显高于模型对照组,, ,虽有升高趋势但无明显统计学意义(p>)。海马神经元LDH%,-(p<), (p<), (p<)均显著低于模型对照组,,虽有降低LDH的一一-一一- -..味~曰一- - ,---一一一~- 2 中文摘要趋势,但无显著统计学意义(p>)。大剂量组和中剂量组LDH泄漏率显著低于小剂量组,呈明显的剂量依赖性。结论:谷氨酸可造成海马神经元的损伤,表现为神经元LDH泄漏率增加,海马神经元存活率降低。给予Dip干预后,LDH泄漏率下降,吸光度上升,表明细胞的损伤程减轻,存活率升高,即Dip可以对抗谷氨酸所致体外培养海马神经元的损伤,起到神经元保护作用。 2. Dip对谷氨酸所致海马神经元胞浆钙超载的保护作用目的:研究Dip对谷氨酸致体外培养海马神经元钙超载的影响,研究谷氨酸对急性分离海马神经元胞浆钙离子浓度的影响以及Dip的保护作用。方法:体外培养海马神经元方法同前,损伤模型制备方法同前,在损伤模型中加入小、中、大三种不同浓度的 Dip ( u mol/L, 1 u mol/