文档介绍：南华大学
硕士学位论文
siRNA抑制STGC3基因表达对NIH3T3细胞生长增殖的影响
姓名:廖银花
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:贺修胜
20070501
原创性声明

本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工
作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的
地方外,论文中不包含其它人已经发表或撰写过的研究成果,也不包
含为获得南华大学或其它单位的学位或证书而使用过的材料。与我共
同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。

作者签名: 日期: 年月日

关于学位论文使用授权说明

本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有
权保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论
文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文;
学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。

作者签名: 导师签名: 日期: 年月日

1
siRNA 抑制 STGC3 基因
表达对 NIH3T3 细胞生长增殖的影响
硕士研究生: 廖银花
指导教师: 贺修胜教授
中文摘要
目的:STGC3 基因是新近克隆的一个候选抑瘤基因。本研究以 STGC3 基因阳性
表达的鼠成纤维细胞系 NIH3T3 细胞为模型,采用 siRNA 技术,使 NIH3T3 细胞
的 STGC3 基因表达下调,观察 STGC3 基因表达下调对 NIH3T3 细胞增殖的影响。

方法:构建针对 STGC3 基因 mRNA 的 -STGC3-siRNA 表达载体,
经脂质体转染,导入 NIH3T3 细胞,G418 筛选,建立稳定的 pSilencer -
STGC3-siRNA/NIH3T3 细胞系。RT-PCR、Western blotting 和免疫细胞化学方法,
检测 STGC3 基因 mRNA 和蛋白表达。通过 HE 染色、绘制生长曲线、软琼脂
集落形成实验及流式细胞仪分析,观察 STGC3 基因表达下调后,NIH3T3 细
胞形态、增殖速度、克隆形成率和细胞周期分布变化。

结果:重组质粒 DNA 经酶切和测序鉴定,结果均证实 -STGC3-siRNA
表达载体构建成功。将 -STGC3-siRNA 和质粒分别转染
NIH3T3 细胞,G418 筛选阳性细胞克隆,经 RT-PCR、Western blotting 及免疫细
胞化学方法检测结果表明,成功建立了 STGC3 基因表达下调的 NIH3T3 细胞系。
普通光学显微镜下观察,-STGC3-siRNA/NIH3T3 细胞与两对照组相
比,核染色加深,细胞变得细长;细胞生长曲线结果显示:
-STGC3-siRNA/NIH3T3 细胞较细胞和 NIH3T3
细胞生长速度快(P< );软琼脂集落形成实验结果证实,
-STGC3-siRNA/NIH3T3 组、组和 NIH3T3 组克
隆形成率分别为(±)% 、(±)% 和(±)%,
4
-STGC3-siRNA/NIH3T3 组克隆形成能力较两对照组显著增强
(P<);流式细胞仪检测结果:-STGC3-siRNA/NIH3T3 组较对照组
细胞群体中处于 S 期和 G2 的细胞数目增加,G0/G1 期细胞数目减少。
结论:
1. 构建了 -STGC3-siRNA 真核表达载体。
2. 建立了 STGC3 基因表达下调的 -STGC3-siRNA/NIH3T3 细胞系。
3. siRNA 抑制 STGC3 基因表达可促进 NIH3T3 细胞增殖。

关键词:小干扰 RNA,STGC3 基因,NIH3T3 细胞,细胞增殖
5
Effect of STGC3-siRNA on the Growth in NIH3T3 Cell Line
Abstract
Objective: STGC3 gene is a candidate tumor suppressor gene cloned recently.
NIH3T3 cell line was selec