文档介绍：万方数据
基因对卵巢癌细胞增殖和周期的影响△碌鱈孙曼生秀杰刘启才李祯汪志辉⋯鞮—著《癌症进展》年碌淼期摘要:目的应用小分子干扰瑂种评蛋彼崽匾煨宰榈鞍兹ゼ谆琇基因的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖和生长周期的影响。方法采用脂质体介导法将一H韭殉舶㎡细胞;实时荧光定量和法检测基因的表达;法检测细胞增殖能力;治鱿赴芷凇=峁晒ψH綥籹后,赴和蛋白表达均明显下降;细胞增殖明显抑制;/谙赴壤黾印=崧跮籹可显著下调基因在卵巢癌细胞中的表达水平,在一定程度上抑制卵巢癌细胞的增殖,导致细胞周期阻滞。关键词:卵巢癌;小分子干扰幌赴鲋常籐籓一赴中图分类号:.文献标志码::狿广州医学院第三附属医院妇产科,广州阒菀窖г菏笛橐窖а芯恐行模阒猦..。△基金项目:广州市科技计划资助项目狤ㄐ抛髡琫—:甤—;籺/.一——瑂簅;籶;;.,琋,珿珻—.
万方数据
材料与方法修饰方式,参与调控染色质的结构和基因的表达。组蛋白甲基转移酶和组蛋白去甲基化酶共同调节组蛋白的甲基化状态,研究发现组蛋白甲基化与去甲基化失衡与肿瘤发生发展密切相多种肿瘤组织中高表达¨胫琢鲈ず蟪矢合关心种芁芤种浦琢鱿赴鲋场D壳耙有多种组蛋白修饰酶成为肿瘤治疗的重要靶点,如组蛋白去乙酰化酶目前在卵巢癌方面相关的研究尚未见报道,讨其对卵巢癌细胞增殖和周期的影响,为进一步探讨在卵巢癌发生发展中的作用提供理论基础。人卵巢癌细胞株由本课题组保存;河贗荆籖约梁小河赥司;兔抗人多克隆抗体购于荆煌抗人多克隆抗体购于荆籋标记荆籔芷谑约梁泄河诹?粕锛际跤邢细胞培养人卵巢癌细胞用含一琇籹’患又侍、阴性对照组侍、干扰组畇侍。转染前欤ǘ允て诘南赴×觯軱的细胞密度接种到装逯校赴诤隙却碩约了得魇樘崛∠赴躌,随后采用实时荧光定量ḿ觳飧髯橄赴蠰因的表达水平,筛选沉默效果最明显的甈法检测以D诓握眨嫌我铮’.’。从μ跫嬖け湫℃×法检测蛋白的表达转染后崛「髯橄赴鞍祝珺法进行蛋白定量。每孔取斗鞍咨涎—凝砑谢叶确治觥5鞍椎南喽远客过/幕叶缺冉屑扑恪J匝橹馗组蛋白甲基化是一种重要的可逆性的表观遗传关。赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶琇是第一个被发现的组蛋白去甲基化酶,调控基因的转录和幕钚裕琀,其抑制剂已经用于肿瘤的治疗,有望与一样成为多种抗肿瘤药物开发的新靶标。但本研究采用技术抑制基因的表达,探材料、癉的山羊抗兔河贘公司;基因、内参照镉蒚竞铣桑籑河公司。方法%斗∥青霉素、贰蝝疵顾氐完全培养液,在℃、,体积分数为的饱和湿度条件下培养、传代。取对数生长期细胞进行试验。纳杓坪秃铣纱覩中检索获得人源基因序列,采用公司的设计软件,根据杓圃则,设计稣攵訪奶匾靤,其序列如下:。.H緎及筛选试验分为空白对照组%~%时转染。以无血清、无双抗的混悬皊,转染蟾缓%胎牛血清的培养液继续培养。转染后的表达转崛「髯橄赴躌并反转录为.,随后行目的片段的扩增。引物:上游’,下游—’,扩增片段为下游弓物:缓蟀妗进行个循环扛鲅旧枇个平行孑硇熔解曲线分析,证实无非特异性扩增。相对表达量采用!髹7ń屑扑恪J匝橹馗次。胶电泳后转移至膜,サ腂室温封闭后,加入一抗体:;產,℃孵育过夜。加入昙堑纳窖蚩雇,室温珽法显影,拍照,采用巍法检测基因沉默对细胞增殖能力’:《癌症进展》年碌淼期,,.籆’,.:.;’,一
万方数据
结果敝罩古嘌尤