文档介绍：湖北中医学院硕士学位论文复方葛根胶囊制备新方法及降糖、降脂作用研究姓名:李津申请学位级别:硕士专业:中西医结合基础指导教师:刘亚明 20060421 湖北中医学院硕士学位论文摘要随着人们生活水平的提高、饮食结构的改变、日趋紧张的生活节奏等诸多因素,全球糖尿病发病率在逐渐增长。耱尿病属中医“消竭”范畴,以多饮、多食?多尿、消瘦、乏力等为主要临床表现。中医对消渴病机的认识,一般认为主要是阴津亏虚,燥热偏胜,而以阴虚为本,燥热为标,两者互果,阴愈虚则燥热愈盛,燥热愈盛则阴愈虚。鉴于阴虚燥热,耗津灼液,聚而成痰;血涩而滞行,每每形成“瘀血”。消渴证的发生、发展、变化一般与“痰浊”、“瘀血”有关,其治亦应重视“利湿化痰”、“活血化瘀”。目前一般认为,胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺陷是2型糖尿病发病的基础。究竟是胰岛素敏感性降低还是胰岛素分泌的改变是原发因素一直有争论。现有的大多数证据支持2型糖尿病是一种异质性疾病,胰岛p细胞功能受损是主要的先天性因素,雨胰岛素抵抗是主要的获得性因素。葛根为豆科植物野葛或粉葛的根,具有发表解肌、升阳透疹、解热生津等作用,从野葛或粉葛的干燥根中提取而成的葛根素,90年代开始应用于糖尿病及其并发症的研究,葛根素在降血糖、抑制蛋白质非酶糖基化、提高胰岛素受体的敏感性等方面均有明显作用,对2型糖尿病及糖尿病周围神经病变、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、糖尿病合并裾心病、高脂血症等有一定疗效,并且取得了一定的成果。葡萄糖耐量因子是一种以三价铬为活性中心的多种氨基酸的络合物,它能把胰岛素结合到膜受体上,一般通过硫氢键实现的,具有促进胰岛素活性增强, 改善胰岛素抵抗的作用。本课题是在中西医结合和中医理论指导下,将中药葛根提取物葛根素和酵母提取物葡萄糖耐量因子(GTF)按一定比例配方,制剂成复方葛根胶囊。并且在此制剂研究的基础上,进一步探讨了复方葛根胶囊降糖、降脂的机制和对瘦素受体基因表达的影响。本课题主要从以下几个部分进行实验研究。首先本实验研究了一种利用发酵技术制备富铬酵母的工艺,从菌种、培养基、铬离子浓度等方面进行了筛选,最终确定其最佳工艺,并且探讨了从此富铬酵母中提取具有生物活性的葡萄糖耐量因子(GTF)方法,主要采用了溶剂萃取、分子过滤和分步层析等技术,通过紫外及红外光谱分析,与国内外文献报道基本一致,通过采用啤酒酵母培养法对提取所得GTF的活性进行测定分析, 用此方法提取所得的GTF有较高的生物活性,可显著加强啤酒酵母对葡萄糖的利用率。将此制得的GTF与葛根素分别处理制成复方葛根胶囊。药效学实验采用了高脂饮食诱导的肥胖模型大鼠,具有高血脂、高体重、高胰岛素血症、高瘦素血症的特点,符合人类单纯性肥胖的临床特点。实验将 72只雄性sD大鼠分组:其中12只采用普通饲料,另外60只采用高脂饲料连续两个月,制造肥胖大鼠模型。造模成功后,将实验性肥胖大鼠随机分为5组:模型组、阳性药(血脂康)组、复方葛根胶囊小、中、大剂量组(分别相当于成人临床剂量的5倍、10倍、20倍)开始灌胃给药,同时除正常组喂以普通饲料外,其余组仍喂养高脂饲料,连续4周,每周测体重,于末次给药后禁食12h, 次日上午,乙醚麻醉下开胸心脏取血,静置分离血清,同时迅速开颅分离出下丘脑。采用酶法测定血清Tc、TG、HDL—c、LDL—c,放射免疫法测定血清胰岛素、湖北中医学院硕士学位论文瘦素水平。结果显示,复方葛根胶囊组大鼠的体重增长趋势较肥胖组缓慢。在第4周时,复方葛根胶囊小剂量组与大剂量组的体重显著低于模型组(P <),治疗后备剂量组体重的增长值与模型组有显著差异(P<)。复方葛根胶囊能降低TG、Tc,与模型组比较(P<,P<,P<),并有明显升高HDL—c水平的作用,与模型组比较均有差异(P<,P<)。另外复方葛根胶囊还可以改善胰岛素抵抗及瘦素抵抗。实验采用了荧光定量聚合酶链式反应(FQ—PcR)技术对各实验组大鼠的下丘脑组织瘦素受体(oB—R)基因的mRNA水平进行了检测,结果提示肥胖大鼠OB—R 基因mRNA水平降低,而复方葛根胶囊有明显提高肥胖模型动物的瘦素受体基因 mRNA水平的作用。以上实验结果表明,酵母菌种均可有效的将无机铬转化为有机铬,不同的菌种与铬离子浓度、培养条件和培养基有关。”g/g。药效学实验提示经复方葛根胶囊治疗1月后,肥胖大鼠体重增长速度减慢,Tc、TG下降, HDL—e升高,高脂血症改善。高脂饮食诱导的肥胖大鼠可以产生胰岛素抵抗与瘦素抵抗,复方葛根胶囊还有改善胰岛素抵抗及瘦素抵抗的作用。并且通过FQ—PcR技术发现其改善瘦素抵抗、胰岛素抵抗的环节可能是通过提高受损的瘦素受体mRNA水平而起作用。关键词:葛根素、葡萄糖耐量因