文档介绍：·中文论著摘要· Cystatin C对人脑微血管内皮细胞A 13代谢的影响刖吾 APP是一种与阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sdisease,AD)的发生、发展密切相关的I型跨膜蛋白,具有膜受体样结构。APP基因定位于2l号染色体,与遗传学连锁分析定位的早老性AD基因位点相重叠。APP的亚型主要的三种为 APP695,APP751,APP770,三种亚型中均包含了AB多肽的部分。APP作为一种管家基因(housekeepinggene)在多种组织中均有所表达,但不同组织的APP 亚型有所不同,如脑组织中主要为APP695,并且有实验证明在AD患者的脑组织中有APP亚型分布失调的现象。目前研究资料表明,APP对神经突的生长和突触的发生、神经元蛋白沿轴突的运输、跨膜信号的传导、细胞粘附、钙代谢起作用,但是都缺乏体内试验的证实。跨膜的APP由假定的旺分泌酶催化裂解成为由膜外部分构成的可溶性分泌片段sAPPa。而经B分泌酶催化裂解后再被丫分泌酶催化裂解则产生Ap。AB具有神经毒性,过量的AB能导致神经退行性病变的级联反应使突触功能丧失,在神经细胞外形成老年斑,最终导致神经元功能丧失。相对于Ap,sAPPer对神经元可塑性和存活、防止神经兴奋性中毒、神经干细胞的增殖、中枢神经系统的发育有重要作用。有文献证明APP基因的复制能引起早老性AD(FAD),另外在小鼠体内APP过表达能导致淀粉样沉积,记忆缺陷,AD 升高,这些结果说明APP的基因剂量对于AD的发生是一个十分有害的因素。虽然APP的加工代谢得到了很好的研究,但是对于APP稳定性调节还知之甚少,因此影响AAP稳定性调节的因素与AB的代谢直接相关。 CystatinC由120个氨基酸构成,最初被鉴定为半胱氨酸蛋白酶抑制剂,也有研究表明Cystatin C也具有刺激细胞生长的功能,其与中枢神经系统的关系如下: (1)Cystatin C能结合可溶性AB,抑制APP转基因小鼠脑内Ap沉积;(2)在 AD病人脑组织和脑脊液中能检测到Cystatin C—Ap复合物;(3)Cystatin C能通过诱导功能性自噬维持神经元存活。最近有许多研究表明迟发性AD与Cystatin C 的基因连锁相关,Cystatin C具有抗淀粉样蛋白生成作用。所以Cystatin C在阿尔茨海默病发病中起到保护作用。人脑微血管内皮细胞(HBMEC)形成血脑屏障与Ap代谢密切相关,但对人脑微血管内皮细胞本身产生APP与Ap代谢的关系还不是很清楚。本研究通过用 Cystatin C处理人脑微血管内皮细胞(HBMEC)来检测APP的代谢,从而为研究A 13的代谢积累新的科学资料,为治疗AD开辟新的方向。方法 l、Westernblot方法检测HBMEC中的Cystatin C表达; 2、流式细胞术体外分析Cystatin C与A13形成复合物是否影响HBMEC对A13IYJ吞噬: 3、CystatinC处理HBMEC后查APP表达,用AGE,L-NAME,H202处理HBMEC 作为对照; 4、用Cystatin C与H202同时处理HBMEC,用western blot方法检澳tAPP表达, 不力ICystatinC的H202组作对照; 5、利用293T细胞mRNA为模板扩增CystatinC的CDS区,将Cystatin C的CDS 区(438bp)克隆至真核细胞表达载体pcDNA B。结果 l、HBMECq]不表达Cystatin C: 2、CystatinC与Ap形成复合物不影响HBMEC对AD的吞噬: 3、CystatinC处理HBMEC后APP表达水平降低; 4、Cystatin ctl使H202弓1起的APP升高表达降低: 5、成功构建Cystatin C的CDS区的真核细胞表达载体。结论 l、HBMEC不表达Cystatin C; 2、Cystatin C与A13形成复合物不影响HBMEC对Ap的吞噬; 2 低; 3、在体夕biiEnfJCystatin C处理HBMEC后APP在mRNA水平和蛋白水平表达降 4、CystatinC与H202同时处理HBMEc后Cystatin C能使H202弓1起的APP升高表达降低。关键词 APP;Cystatin C;H202;L=NAME)AGE;Ap,阿尔茨海默氏病。 3 英文论著摘要 The effectsofCystatin C onAp metabolism ofhuman brain microvascular endothelial cells Introduction APP is atype transmembrane protein withmembrane receptors likestructure, w