文档介绍：重庆医科大学
硕士学位论文
mdr1基因介导的骨髓移植在小鼠的安全性研究
姓名:王江波
申请学位级别:硕士
专业:儿科学
指导教师:王珊
20070411
咖符号说明轒互补脱氧核糖核酸移植物抗宿主反应外周血单个核细胞英文缩写英文全称中文对照三磷酸腺苷小牛血清牛血清白蛋白秋水仙碱二甲亚砜柔红霉素脱氧核糖核酸胎牛血清流式细胞术造血干细胞改良杜氏培养基狾左旋谷***酰***多药耐药多药耐药基因单个核细胞信使核糖核酸小鼠成纤维细胞自然杀伤细胞磷酸缓冲液聚合酶链反应蚿聚凝***~∞叹骨髓糖蛋白一重庆医科大学硕士研究生学位论文铲’~篊’
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至生重庆医科大学研究生学位论文独创性声明撇我学位论文版权使用授权书期:边盟。鱼究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他本入完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保论文作者签名:指导教师签名:本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。学位论文作者签名:位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。
基因介导的骨髓移植在小鼠的安全性研究摘要目的:恶性肿瘤已成为严重威胁人类健康的疾病之一。尽管人类在肿瘤治疗方面有了较大的进步,综合治疗的完善,新的治疗手段不断出现,但儿童恶性肿瘤总体长期存活率仅~%。化疗在杀死肿瘤细胞和防止肿瘤复发和转移方面仍起着不可替代的作用。但是化疗过程中存在的两大障碍严重影响了化疗的疗效,即琢鱿赴曰疗药物产生耐药性,其对化疗药物的不敏感而导致化疗失败;疗药物在杀死肿瘤细胞的同时造成严重的骨髓抑制,由于病人不能耐受导致化疗方案不能实施而失败。目前已经证明造成肿瘤产生耐药的琺有关。肿瘤细胞由于高表达基因使其对化疗药物不敏感而不能被有效杀灭;骨髓细胞表达基因较低而对化疗药物异常敏感,极易被化疗药物损伤。本研究用含人全长逆转录病毒载体转染/∈蠊撬璧ジ龊讼赴庠葱詍虻既胄∈蠊撬璧ジ核细胞检测转染后基因在靶细胞的表达情况,并建立小鼠骨髓移植模型观察转染基因的造血细胞在移植到受体小鼠后对造血恢复的影响以及移植的造血细胞自身在小鼠体内的变化,以便了解逆转录病毒介导的基因转染造血干细胞在移植后对受体小鼠血液系统方面的安全性影响。原因主要与多药耐药基因重庆医科大学硕士研究生学位论文国家自然科学基金资助项目
方法:对携带人全长的逆转录病毒包装细胞疉用秋水仙碱/猩秆。皇占《旧锨液并采用病毒上清转染法转染小鼠骨髓造血细胞;采用椒ā⒚疫组化染色法分别从基因、蛋白质水平检测基因在骨髓单个核细胞中的表达情况;骨髓预处理上应用三种不同剂量的倒股湎哒丈洌鄄觳煌樾∈笤煅;指吹谋浠榭觯观察移植了转染有基因的造血细胞的/∈笤煅;指辞榭觯并应用免疫组化与法检测骨髓单个核细胞中基因的表达情况,同时检测骨髓单个核细胞部分重要增殖凋亡因子.、尉.、的表达。结果:锼杉钌秆『螅嘌陌跋赴鸓疉上清液病毒滴度提高了痬//,经离心浓缩后病毒滴度提高痬。/;ㄖな低庠葱詍蚩捎行地整合到小鼠骨髓单个核细胞基因组中并进行转录表达;庖咦化法测得体外转染细胞糖蛋白—,泶锏难粜率为.%;獃射线照射后组小鼠在炷谌ú%,而组、,均恢复到正常小鼠外周血白细胞水平,至移植潞螅罢咄庵苎0紫赴骄剖、重庆医科大学硕士研究生学位论文
疞,后者为疞,—表达平均阳性率为ビ.%;植转染基因单个核细胞组小鼠骨髓单个核细胞的增殖因子、.、,。结论;通过逆转录病毒载体可在体外将外源性基因转入小鼠骨髓单个核细胞中,转染的基因能