文档介绍：复旦大学
博士学位论文
斑马鱼心脏发育相关基因tbx2的表达和功能研究
姓名:崇梅
申请学位级别:博士
专业:儿科学
指导教师:桂永浩
20070410
英文缩略词刚前侧板中胚层心房特异性肌球蛋白重链房室管二硫苏糖醇吗啉环寡核苷酸心房利钠肽多聚酶链式反应骨形成蛋白先天性心脏病对照增强型绿色荧光蛋白受精后小时流入道流出道苯硫脲谢欠肭心室特异性肌球蛋白重链昏甎斑马鱼心脏发育相关基因的表达和功能研究堋
日期:竺哮中≥山字论文独创性声明论文使用授权声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所傲的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名日期:本人完全了解复旦大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。导师签名:、矿
中文摘要第一部分斑马鱼基因在心脏发育中的时空表达谱分析第二部分斑马鱼基因阻抑和过表达心脏发育的表型研究目的基因是琓盒B家蜃踊蚣易宓某稍敝唬泶镉胚胎发生中的多个组织和器官。在鼠的心脏发育中,表达于相对于非室腔心肌带的流出道、内弯、房室管和流入道。斑马鱼是研究心脏发育的理想模式生物,纺基因在斑马鱼心脏发育中的作用研究目前尚未见报道,作为探索基因功能的第一步,我们描绘了基因在心脏发育中的时空表达谱。方法体外转录地高辛标记的反义秸耄占呗碛阈脑喾⒂喙时期的胚胎,进行整胚原位杂交。结果在心脏中的表达首先发生于褰谄诘那安嘀信卟愕牧讲嗲颍精后小时泶镉谠嫉男墓埽婧笏孀判墓艿姆⒂姆啃氖业男成,除了预期房室交晃处外,逐渐在心管的大部分消失,笾鸾ゾ窒抻房室管,泶锵А结论整胚原位杂交是研究斑马鱼特定基因时空表达的良好方法。在斑马鱼心脏发育中的表达模式提示了可能与心脏房室的分化和房室管的形成有关;与鼠胚表达谱的对比说明了基因进化上时空表达谱的高度保守性,并且探测到在斑马鱼心脏发育中的最初表达早于鼠胚的心脏,提示基因对斑马鱼心脏发育的调节作用可能早于对鼠类心脏发育的影响。目的在对斑马鱼基因心脏发育时空表达谱分析的基础上,研究斑马鱼基因阻抑和基因过表达对心脏发育的影响,以说明基因在心脏发育中的作用。方法吗啉修饰的反义寡核苷酸是进行基因抑制的良好方法。,在斑马鱼受精卵的单细胞期,进行不同浓度的显微注射,并通过荧光蛋白融合标记实验和共注射拯救实验,;基因过表达是通过给斑胚胎心脏发育的影响。结果斑马鱼心脏发育相关基因的表达和功能研究
第三部分斑马鱼基因阻抑胚胎心脏标记基因表达分析心脏畸形随着注射剂量的增加而出现比较一致的表型,而夸组胚胎没有出现明显的畸形;蛅的共注射减少了咛バ脑畸形的发生率及减轻了心脏畸形的程度,;榕咛バ脑嗳毕莅ㄐ氖曳⒂良、心房扩张、房室管和瓣膜异常以及心率缓慢、心律不齐、心脏停搏、血液返流等,并根据心脏发育异常的程度分为轻、中、重度畸形组;.基因过表达胚胎没有见到心腔的形成。结论斑马鱼是研究心脏发育的理想模式生物,基因阻抑是研究基因功能的良好方法。在房室特异性分化、房室管、瓣膜和传导系统形成方面起了重要的作用。目的,,分别是心房、心室、心房心室肌早期分化的特异性标记基因,.切脑嘣姆肿颖昙牵琤谋泶镒畛醴⑸谛脑嗟脑基,最终局限于静脉窦房交界区、房室交界区及流出道,与房室管和瓣膜的形成密切相关。对榕咛ソ幸陨闲脑喾⒂匾煨员昙腔因的表达分析,以进一步阐明基因在斑马鱼心脏发育中的作用。方法进行了以上心脏标记基因探针的构建,,表达范围缩小,表达强度明显增强,.谋泶锘菊#琤泶镌銮浚在心房和心室还有较强的表达,并持续到一心房交界区可见明显扩张;于竺挥谐鱿终5耐怂酰姆杂谐中泶铩结论斑马鱼基因阻抑胚胎心脏标记基因的表达分析进一步证实了基因阻抑胚胎心脏表型的变化,表明了在房室分化、房室管形成、瓣膜发育、流出道和静脉窦一心房交界区的形成等方面起着重要的作用。关键词斑马鱼,,心脏,基因表达,反义吗啉环寡核苷酸,,榕咛ピ谛脑嗍账跣浴⒔诼珊托翁Х⑸铣鱿至艘斐#的表达仍然存在,静脉窦心室部位异常表达,
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