文档介绍：长非编码虻骺亟嶂背Π┳R葡喙氐功能区和靶基因的鉴定课题来源:专申请人导师答辩委员会主席徐川丁彦青教授钟雪云教授韩慧霞教授薛月日广州国家自然科学基金课题名称学位指教答辩委员会成员病理学李祖国副教授张雅洁教授玲教授论文评阅人谢丹教授邓永键副教授·业南方医科大学级硕士学位论文
控结直肠癌转移相关的功能区和靶基因的鉴定导师:李祖国副教授硕士研究生:徐川摘要结直肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,在我国的发病率呈逐年上升的趋势。近些年来,虽然随着诊疗新技术的应用和化疗药物的不断更新,结直肠癌患者的预后得到了极大地改善,但是患者总的生存率并没有得到显著提高,主要原因是多数结直肠癌患者在行根治性手术前己出现了微转移。因此,阐明结直肠癌发生及转移的分子机制,是提高结直肠癌患者生存率和治愈率的关键问题,也是当前肿瘤研究的热点问题。肿瘤的转移是一个多步骤、多基因参与的复杂过程。许多基因参与肿瘤转移的过程,但其具体调控机制还有待进一步深入研究。近年来随着人类基因组计划的完成,以及蛋白质组学和转录组学技术的蓬勃开展,促使檠а究日趋成熟,这些新技术为揭示肿瘤转移机制带来了新的希望。目前人类基因组中的非编码甤琻谏讨兴⒒拥牟豢珊视的重要作用已经逐步得到广泛的重视和认可。通常,基因组研究集中在对基因组序列中开放读码框的注释和功能划定,然而在真核细胞中,仅有一小部分组分是基因组编码蛋白质的氨基酸序列信息,未知功能的非编码序列占人类基因组的%,它们在调节基因表达中起着极为重要的作用。蝗衔#所有真核细胞调节中起着关键作用,可能参与转录调控、粗啤⑷旧迮对和染色体凝集等过程。目前最新的研究成果显示,有一大类功能性肿
或隐藏在蛋白质编码区之间或位于编码蛋白质区内,其功能有待进一步阐明。我们在结直肠癌特异性转移相关基因的分析研究中,通过对来源同一亲本具有不同转移潜能的结直肠癌细胞系进行表达谱芯片分析,.,它是一个非编码粲诔し潜嗦琹,定位于人染色体全长缺乏明确的开放式阅读框,不编码蛋白质。在不同转移能力的结直肠癌细胞系中差异表达,我们推测赡芫哂卸越嶂背Π┳移相关基因的调控作用,与结直肠癌的转移密切相关。┳橹⒅琢鲎R谱橹驼W橹以及秩私嶂背Π┫赴甑腗表达情况,分析后发现在结直肠癌中的表达与肿瘤的转移密切相关。同时本课题组在前期的实验研究中运用生物信息学计算方法和蛋白质组学技术,筛查到了一个可能是调控的靶标基因,为进一步分析和鉴定长非编码基因调控结直肠癌转移的相关靶基因奠定了坚实的基础。为了进一步研究和论证长非编码虻骺亟嶂背Π┳R频机制和所调控的靶基因的功能,本研究分别从两个不同层面,全面分析结构和功能。首先采用了慢病毒稳定转染的方法,利用聊术,蚏激活技术,芯基因对结直肠癌细胞株鲋场⑶窒白R频淖饔茫佣教虻谋泶锒越嶂背Π┫赴闟生物学特性的影响;其次从虻慕峁共忝妫ü;最后,利用本课题组前期采用的生物信息学计算方法,结合本次研究采用的基因芯片技术,筛查到了一系列不同表达水平的结直肠癌细胞株牟钜毂泶锏幕颍俳岷媳究翁庾榍捌诶玫鞍字组学筛查到的一系列差异表达蛋白,综合确定出长非编码调控结直肠癌转移的靶标基因,为后续研究结直肠癌转移相关基因摘要.Ⅱ
第一部分基因全长的突变区域和核心功能区的研究第二部分长非编码蛟诮嶂背Π┓⒄埂⒆R浦械淖饔所调控的靶基因的生物学功能和进一步深入研究结直肠癌发生发展的机理提供了重要依据和新的思路。基因长达,给我们的研究带来了一定的困难。为了更好的研究结直肠癌转移的分子机制,寻找耐槐淝蚝秃诵墓δ芮N颐运用降落际鹾筒庑蚣际醴直鸺觳饬瞬煌R魄蹦艿慕嶂背Π┫赴蚐及结直肠癌原发癌组织和正常组织基因的突变情况。设计可分段扩增的砸铮崛∽躌和分卫┰龀鯩全序列。通过分段测序技术鉴定分析,┫赴R葡喙厣镅形1浠南喙性。研究结果显示结直肠癌细胞株纳ぁ⒃鲋衬芰Γ约疤逋馇窒移能力与个片段/的表达水平密切相关。当个片段/的表达水平升高时,细胞的活力大大提升,增殖速度也明显加快;更有趣的是,在实验研究中发现猯基因中的..墓泶锸沟孟赴脑鲋澈侵袭潜能均显著增强,说明蛑械獠糠智蛴虢直肠肿瘤细胞的转移存在着明显的正相关关系,因此我们推测蛑的问荕,基因的核心功能区。长非编码基因核心功能区的发现为后续虻墓δ苎芯刻峁┝思ù蟮乇憷基因最初是在研究人非小细胞肺癌的转移中通过减除杂交法筛选鉴定出的一个新的长非编码K嵌ㄎ挥谌死染色体上长约硕士学位论文
第三部分参与调控结直肠癌发展、转移的分子机制的初步探讨的长非编码狈τ幸庖白质。为进一步研究基因在结直肠癌转移中的作用,我们分别采用