文档介绍：基因组基因组 DNA DNA 的提取(以果蝇为例) 的提取(以果蝇为例) 预备知识预备知识?核酸是重要的生物大分子之一,脱氧核糖核酸( DNA )是核酸的一种, DNA 是绝大多数生物(除少数 RNA 病毒外)记录、存储、传递遗传信息的分子。近年来,分子生物学技术迅速发展,在分子遗传学研究领域的诸多方面涉及到抽提基因组 DNA 的方法。 DNA 的提取是进行 PCR 扩增、 Southern 杂交、限制性片段长度多态性分析等实验的基础。二、实验原理使用消化缓冲液使 DNA 从细胞内释放出来, 65度温育可以加速 DNA 溶解,酚——***仿异戊醇抽提可以将蛋白质与 DNA 分离,冷的异丙醇沉淀 DNA , 70%的乙醇洗去 DNA 表面的残留有机溶剂。三三实验材料实验材料新鲜存活的果蝇或- 新鲜存活的果蝇或- 20 20℃℃冻存的果蝇冻存的果蝇 5 5~ ~ 10 10个。个。四四实验仪器及用具实验仪器及用具玻璃棒、烧杯、离心管、量筒、分析天平、玻璃棒、烧杯、离心管、量筒、分析天平、水浴锅、台式高速离心机、水浴锅、台式高速离心机、 4 4℃℃冰箱、长玻璃冰箱、长玻璃吸管、微量加样器、枪头、紫外分析仪、琼吸管、微量加样器、枪头、紫外分析仪、琼脂糖电泳装置。脂糖电泳装置。五、药品和试剂五、药品和试剂??酚( 酚( Tris Tris 饱和酚)、***仿、异戊醇、十二烷基硫酸钠饱和酚)、***仿、异戊醇、十二烷基硫酸钠(SDS) (SDS) 、、 Tris Tris 碱、乙二***四乙酸( 碱、乙二***四乙酸( EDTA EDTA )、异丙醇。)、异丙醇。??溶液配制: 溶液配制: ??消化缓冲液消化缓冲液:含:含 100mM 100mM 的的 Nacl Nacl , , 10mM 10mM ( ( ) ) , , 25mM 25mM 的的 EDTA EDTA ( ( ) ) , , %的%的 SDS SDS 。。?? TE TE 缓冲液缓冲液( ( ):含):含 10mM 10mM ( ( ) ) ,1mM ,1mM 的的 EDTA EDTA ( ( )。)。??电泳缓冲液电泳缓冲液 TAE TAE ( ( 50 50× × TAE TAE ):取):取 ,冰醋酸,冰醋酸 , , EDTA ()20ml EDTA ()20ml ,加蒸馏水至,加蒸馏水至 100ml 100ml 。。 1 1× × TAE TAE 为配制琼脂糖凝胶及其电泳的应用缓冲液。为配制琼脂糖凝胶及其电泳的应用缓冲液。?? % %琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶的配制: 的配制: 称取称取 琼脂糖,加入琼脂糖,加入 40ml 1 40ml 1 × × TAE TAE ,于,于电炉上加热至沸腾,待凝胶冷却至电炉上加热至沸腾,待凝胶冷却至 50 50℃℃左右(手试微烫),加入左右(手试微烫),加入 3 3μμ l l GoldViewTW GoldViewTW 荧光染料荧光染料,混匀后将胶倒入插好梳子的制胶板上,冷却后备,混匀后将胶倒入插好梳子的制胶板上,冷却后备用。用。六、实验步骤六、实验步骤 1 1) ) 取取6 6只麻醉的果蝇(让***挥发干净)放入只麻醉的果蝇(让***挥发干净)放入 离心管中, 离心管中, 加入消化缓冲液加入消化缓冲液 30 30μμl l,用,用 200 200 μμ l Tip l Tip 枪头迅速捣碎。枪头迅速捣碎。 2 2) )补加消化缓冲液补加消化缓冲液 400 400 μμl l,混匀,置,混匀,置 65 65℃℃温浴温浴 30 30分分钟每钟每 10 10分钟摇分钟摇荡一次,以使样品被充分消化。荡一次,以使样品被充分消化。 3 3) )取出离心管加入取出离心管加入 400 400 μμ l l 酚:***仿:异戊醇( 酚:***仿:异戊醇( 25 25: : 24 24: :1 1)的混)的混合物,盖紧管盖,上下颠倒充分混匀,抽提样品合物,盖紧管盖,上下颠倒充分混匀,抽提样品 5min, 5min, 12000rpm 12000rpm 离心离心 5 5分钟。分钟。 4 4) )小心吸取上清转移至新的离心管中。加入小心吸取上清转移至新的离心管中。加入 400 400 μμl l异丙醇,轻异丙醇,轻轻混匀轻混匀 3min 3min ,此时可见白色线团状物质出现,