文档介绍：.页眉.. .页脚. 前言血清蛋白: 血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者。当身体需要能量或者需要建造材料时,脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中,脂肪酸被血清蛋白获取,并被运送到需要的部位。牛血清白蛋白的相对分子质量为 10的 4 次方这个级别,它不是一定的, 是多聚物, 有的地方测的 70 000 , 这就是一个数据了。在做 PCR 的时候会用到它。牛血清蛋白是血液的主要成分, 分子量 68kD 。等电点。含氮量 16% ,含糖量 % 。仅含已糖和已糖***,含脂量只有 % 。白蛋白由 581 个氨基酸残基组成,其中 35 个半胱氨酸组成 17 个二硫键, 在肽链的第 34 位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、 PH 缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中, 添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。醋酸纤维薄膜电泳: 醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于***等有机溶液中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜,厚度以 — 为宜。太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。应用醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价。.. .页脚. 清蛋白,血红蛋白,球蛋白,脂蛋白,糖蛋白,甲胎蛋白,类固醇激素及同工酶等的分离分析中, 尽管它的分辨力比聚丙酰***凝胶电泳低,但它具有简单,快速等优点。特点: 1.( 1) 醋酸纤维薄膜对蛋白质样品吸附极少,无“拖尾”现象, 染色后背景能完全脱色, 各种蛋白质染色带分离清晰, 因而提高了测定的精确性。( 2 )快速省时。由于醋酸纤维薄膜亲水性较滤纸小,薄膜中所容纳的缓冲液也较少, 电渗作用小, 电泳时大部分电流是由样品传导的, 所以分离速度快, 电泳时间短, 一般电泳 45— 60min 即可, 加上染色, 脱色,整个电泳完成仅需 90min 左右。( 3) 灵敏度高, 样品用量少。血清蛋白仅需 2μl 血清, 甚至加样体积少至 μl ,仅含 5μg 蛋白样品也可得到清晰的分离带。临床医学检验利用这一点,检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。( 4 )应用面广。某些蛋白在纸上电泳不易分离,如胎儿甲种球蛋白,溶菌酶,胰岛素,组蛋白等用醋酸纤维薄膜电泳能较好地分离。( 5 )醋酸纤维薄膜电泳染色后,经冰乙酸,乙醇混合液或其它溶液浸泡后可制成透明的干板,有利于扫描定量及长期保存。 2 、醋酸纤维薄膜电泳与聚丙烯酰***凝胶电泳相比,操作简单,但分离效果不太好。如血清蛋白在醋酸纤维素薄膜电泳中, 只能分离出 5—6 条区带,而聚丙烯酰***凝胶电泳可分离出数 10 条区带。.页眉.. .页脚. 一、实验目的 1. 掌握电泳法分离血清蛋白质的原理; 2. 掌握血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的操作方法。二、实验原理 1. 电泳: 是指带电粒子在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定 pH 条件下, 不同的蛋白质由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷, 因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,即它们的电泳迁移率不同,因此,可使它们分离 2. 影响电泳迁移率的因素: 内在因素:蛋白所带净电荷的量、蛋白的大小和形状外界因素