文档介绍：α-淀粉酶菌株摇瓶发酵初筛及酶活力测定
目的要求
了解利用微生物摇瓶发酵初筛的目的。
了解发酵用培养基的配制要求。
掌握碘比色法(部颁标准)测定α-淀粉酶活力的原理和方法步骤。
发酵培养基(100mL装于500mL三角瓶)
可溶性淀粉 8g;
豆粕粉 4g;
Na2HPO4 .12H2O ;
(NH4)2SO4 ;
CaCl2
NH4Cl ;
CaCO3
水100mL
℃灭菌20分钟
发酵培养基配制说明
三角瓶规格要统一。
先将不溶解的可溶性淀粉、豆粕粉、 CaCO3分别称于500mL三角瓶。
将无机盐称量后先溶解于水中,~,再用量筒量取100mL加于三角瓶中,轻摇混匀。
℃灭菌20分钟
灭完菌后取出,要马上轻摇混匀(?)。
种子培养基(下周使用)
可溶性淀粉 3g;
Na2HPO4 .12H2O ;
(NH4)2SO4 ;
CaCl2
NH4Cl ;
4%豆粕粉浸出液 100mL
煮沸使淀粉溶解后,取50mL分装于250mL三角瓶(2瓶)包扎;取5mL分装于18×180mm试管中(5支),加塞包扎。
℃灭菌20分钟
其它器材
1mL无菌吸管 10支
2mL无菌吸管 5支
相关碘液的配制
碘原液:称取碘11g,碘化钾22g,置于小烧杯中,加10ml蒸馏水使之溶解,然后转入容量瓶中。再加少量的蒸馏水洗涤烧杯数次,洗涤液均转入容量瓶中,最后定容至500ml。摇均后放于棕色瓶中备用。
比色稀碘液:取碘原液2ml,加碘化钾20g,再用蒸馏水定容至500ml。摇均后放于棕色瓶中备用
标准比色碘液:取碘原液15毫升,加碘化钾8克,用蒸馏水定容至500毫升。储藏于棕色瓶内。
-柠檬酸缓冲液:
-柠檬酸缓冲液:称取磷酸二氢钠(),柠檬酸(),先在烧杯中使之溶解,然后转入容量瓶中定容至1000ml。
2%可溶淀粉溶液及标准糊精溶液配制
2%可溶淀粉溶液:称取20g可溶淀粉,放入小烧杯中,加少量蒸馏水做成悬浮液。然后在搅拌下注入沸腾的700mL蒸馏水中,继续煮沸一分钟(透明),冷却后用pH6磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液定容至1000ml。
标准糊精溶液:,然后倾入90毫升正在煮沸腾的蒸馏水中,冷却后定容至100毫升,滴加数滴甲苯(现配现用就不用加),冰箱保存。
标准终点色溶液
1、第一种标准终点色溶液
取1mL标准糊精液和3mL标准稀碘液混合。
2、第二种标准终点色溶液
A液:精确称取氯化钴()(K2CrO7),用蒸馏水定容至500ml。
B液:精确称取络黑T40mg,用蒸馏水定容至100ml。
同时取A液40ml、B液5ml、混合后置于冰箱中待用。混合液在15天内使用有效。