文档介绍：华南师范大学实验报告学生姓名林鸿锦学号专业综合理科二班年级、班级07级课程名称生物化学实验实验项目Folin-Wu法测定血液葡萄糖含量实验类型□验证□设计□综合试验时间2008年11月10日实验指导老师陈文利实验评分一、目的学会用Folin-Wu法测定血液中葡萄糖含量。二、原理葡萄糖的半缩醛羟基具有还原性,在加热条件下可使碱性铜试剂中的Cu2+还原为黄色的氧化亚铜沉淀,而其本身被氧化为羧基。氧化亚铜可使磷钼酸还原成蓝色的钼蓝,蓝色的深度与葡萄糖的浓度成正比,故可用比色法测定钼蓝的光吸收值来测定葡萄糖的浓度。3Cu2O+2MoO3→6CuO+Mo2O3(氧化亚铜)(钼蓝)血糖即指血液中存在的葡萄糖。由于血液中成分复杂,尤其有许多种蛋白质存在,它们对血糖的测定会产生干扰。因此,目前常用钨酸法处理抗凝血来制备无蛋白滤液,然后用来测定无蛋白滤液中的葡萄糖含量。Na2WO4+H2SO4→H2WO4+Na2SO4(钨酸钠)(钨酸)在测定过程中,由于空气中的氧对Cu2O会产生再氧化作用从而影响测定结果,因此实验中要采用特制的福林—吴宪血糖管——有一细颈,可以尽量减少与空气的接触(如右图)。三、材料、试剂和器具材料饥饿16h的鸡。试剂(实验室已制备)Folin-吴宪式血糖管1、10%钨酸钠溶液2、1/3mol/L硫酸溶液3、标准葡萄糖溶液()4、碱性铜试剂5、磷钼酸试剂6、草酸钾()器具烧杯试管及试管架玻璃棒Folin-吴宪式血糖管小漏斗可见光分光光度计移液管电炉四、实验过程制备无蛋白滤液杀鸡取血后立即按2g草酸钾/L血液的比例加入草酸钾,以制备抗凝血。。。小心擦去管外血液后,于试管底部缓缓放出血液。吸取试管内蒸馏水吹洗吸管数次后,充分摇匀,使血液完全溶血。注意不要使血液粘附于移液管管壁。加入1/3mol/L硫酸溶液1mL,边加边摇,摇匀后放置5min。过滤、收集滤液。由于第一次滤液不清,于是重新过滤,直到滤液澄清。至此,所制得的无蛋白滤液为20倍稀释的无蛋白血滤液,。血糖的测定取血糖管3支,编号后按下表操作。(单位:mL)血糖管编号1(空白管)2(标准管)3(测定管)----无蛋白血滤液--------,沸水浴中煮8min,勿摇动取出,流水冷却。溶液颜色蓝色(无Cu2O生成)黄色(生成Cu2O)黄绿色(Cu2O较少)。溶液颜色无色(无Mo2O3生成)深蓝色(生成Mo2O3)蓝色(Mo2O3较少)-:(1),即2mL滤液所含葡萄糖mg数/=1mL全血所含葡萄糖mg数。(2)测定管A620/标准管A620=2mL滤液所含葡萄糖mg数/2mL标准葡萄糖mg数。(3)要求的是酶100mL全血所含葡萄糖mg数,所以乘以100。综上,可得到上面的公式。将数据代入公式,则每