文档介绍：细胞生物学与细胞工程实验室实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五DNA的细胞化学一Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验荧光显微镜的原理和使用一、 实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法;掌握荧光显微镜的使用方法和使用屮的注意事项。二、 实验原理荧光显微镜是选择由高压***灯或类似光源发出一定波长的激发光,激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后,观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。与普通光学显微镜一样,荧光显微镜也有物镜、H镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。所不同的是,荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统,它投射到样品上的是特定波长的激发光血不是普通图1荧光显微镜的可见光。在激发光的作用下,样詁屮的荧光物质产生发射光(即荧光)。因此,荧光显微镜观察到的是样品屮能产生荧光的部分所呈现的荧光映象,普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态,从激发态回到某态时,就能在极短的吋间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光),这种光就称为荧光。若停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光,称为自发荧光(或直接荧光),如叶绿索的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。有的生物材料本身不发荧光,但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光,这种荧光称为次生荧光(或间接荧光),如叶绿体吸附叮喘橙后可发桔红色荧光。一、 实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法;掌握荧光显微镜的使用方法和使用屮的注意事项。二、 实验原理荧光显微镜是选择由高压***灯或类似光源发出一定波长的激发光,激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后,观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。与普通光学显微镜一样,荧光显微镜也有物镜、H镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。所不同的是,荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统,它投射到样品上的是特定波长的激发光血不是普通图1荧光显微镜的可见光。在激发光的作用下,样詁屮的荧光物质产生发射光(即荧光)。因此,荧光显微镜观察到的是样品屮能产生荧光的部分所呈现的荧光映象,普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态,从激发态回到某态时,就能在极短的吋间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光),这种光就称为荧光。若停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光,称为自发荧光(或直接荧光),如叶绿索的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。有的生物材料本身不发荧光,但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光,这种荧光称为次生荧光(或间接荧光),如叶绿体吸附叮喘橙后可发桔红色荧光。利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时,将受到许多因素的影响,如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察吋应抓紧吋间,有必要吋立即扌n照。三、实验用品荧光显微镜、锡子、载玻片、盖玻片、解剖刀、%□丫I定橙染色液(acridineorange)>蒸憾水、水葫芦叶片(-)荧光显微镜的构造1、 基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等)的基础丄组成的。荧光光源-•般采用高床***灯(50-200W),它可发出各种波长的光,但每种荧光物质都有一个产生最强荧光的激发光波长,所以需加用激发滤片(一•般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片),仅使一定波长的激发光透过照射到标木上,而将其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后,在极短吋间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专一性,一般都比激发光弱,为能观察到专一的荧光,在物镜后而需加阻断(或压制)滤光片。它的作用有二:一是吸收和阻挡激发光进入FI镜、以免于扰荧光和损伤眼睛,二是选择并让特异的荧光透过,表现出专一的荧光色彩。两种滤光片必须选择配合使用。2、 光路荧光显微镜就其光路来分有两种:透射式荧光显微镜:激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野集光器,也可用普通集光器,。其优点是低倍镜吋荧光强,。落射式荧光显微镜:这是近代发展起來的新式荧光显微镜,与上不同处是激发光从物镜向下落射到标本表而,即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路屮需加上一个二向色镜,它与光铀呈45。角,激发光被反射到物镜屮, 图2落射式光路并聚集在样品上,样品所产生的荧光