文档介绍：德氏乳杆菌保加利亚亚种的电转化条件优化哈尔滨工业大学2009届本科优秀毕业设计(论文)选集德氏乳杆菌保加利亚亚种的电转化条件优化食品科学与工程学院,张旭指导教师,崔艳华摘要:德氏乳杆菌保加利亚亚种()是最具经济价值的乳酸菌之一,在世界上广泛应用于酸奶和其它发酵乳的生产。当前对该菌的代谢机制等方面研究甚少。外源基因的转化效率是制约其分子代谢机制研究的重要因素。本研究以pMG36c为材料,。结果表明,在电转化过程中,电场强度、质粒的浓度、细胞生长状态均对转化效率有明显影响。本研究得到该菌株的最适电转化条件为:对数初期的细胞,质粒浓度为100ng加入到50μlOD600为45的样品中,在103kV/cm电场强度下电转化,转化后细胞在复壮培养液中培养3h后涂布选择性培养基,×10CFU/µgDNA。关键词:德氏乳杆菌保加利亚亚种;电转化;生长时期;转化效率Abstract:-positivebacteria,hasbeenwidelyusedinyogurtandotherfermentationmilkintheworld,,includingelectricfieldstrength,,electrotransformationatthe10kV/cm,with100ng3plasmidper50μlsample,×10CFU/µ:、大多数G+C含量较低、能够发酵碳水化合物产生乳酸的革兰氏阳性菌。除部分病原菌外,大部分乳酸菌是有益菌。其中部分乳酸菌具有调节机体胃肠道微生态平衡,降低血清胆固醇、控制内***、抑制病原菌、调节免疫能力等诸多益生功能,是重要的益生菌。目前,乳酸菌已广[1-2]泛应用于食品、轻工业、医药、饲料等多个领域。德氏乳杆菌保加利亚亚种()是最具经济价值的乳酸菌之一,在世界上广泛应用于酸奶和其它发酵乳的生产。尽管研究者对其进行了大量研究,但主要集中在发酵性能和应用研究。而对该菌的代谢机制等方面研究甚少,主要原因是该菌的遗传转化较为困难。本研究拟从德氏乳杆菌保加利亚亚种的生长时期、外源质粒浓度和电转化参数等几个因素着手,优化该菌的电转化操作,建立最佳的电转化平台,为今后该菌的重要基因功能鉴定和分子代谢机制的研究奠定基础。、德氏乳杆菌保加利亚亚种由本实验室保存。,-600-哈尔滨工业大学2009届本科优秀毕业设计(论文)选集带有***霉素抗性的大肠杆菌乳酸菌穿梭质粒,由本实验室保存。、DL2000Marker购自TaKaRa公司。Tris饱和酚购自上海生工生物公司。二硫苏糖醇(DTT)、吐温80、KHPO、NaAc、CHO(NH)、MgSO?7HO、MnSO?4HO等试剂均为国产分24667424242析纯试剂。,稀释1000倍,测定并记录样品液在280nm和260nm处的吸光度值。质粒DNA浓度=50µg/ml×A×,方法参见《分