文档介绍：台《自然科技资源收集、整理、保存技术规程研究与制定》项目组二〇〇四年十二月十日微生物菌种常规保藏技术规程(试行) Ⅶ 2 目次前言……………………………………………………………………………………… 2 引言……………………………………………………………………………………… 3 1 范围………………………………………………………………………………………… 4 2 定义………………………………………………………………………………………… 4 3 基本原则…………………………………………………………………………………… 5 4 方法………………………………………………………………………………………… 5 附录A 定期移植保藏法………………………………………………………………… 6 附录B 液体石蜡保藏法………………………………………………………………… 9 附录C 沙土管保藏法………………………………………………………………… 11 参考文献…………………………………………………………………………………… 13 Ⅶ 3 前言本规范由台建设项目提出。本规范起草单位: 中国农业科学院土壤肥料研究所、中国食品发酵工业研究院、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所。本规范主要起草人: 程池、李金霞、胡海蓉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、张月琴、陈敏等。Ⅶ 4 引言微生物菌种常规保藏是一类重要的基本操作技术, 广泛应用于科学研究、教学及生物技术产业, 是保护微生物菌种资源的重要手段, 是科研教学及生物技术产业正常运转的重要保障。本规程包括定期移植保藏法、液体石蜡保藏法和沙土管保藏法三种常用微生物菌种保藏方法。制定本规程是为了规范微生物菌种常规保藏技术操作, 加强管理, 以达到保护微生物菌种资源,利用微生物菌种资源及实现资源共享的目的。Ⅶ 5 微生物菌种常规保藏技术规程 1 范围本规程规定了微生物菌种常规保藏技术的基本原则和方法。本规程适用于微生物菌种的常规保藏工作。 2 定义本规程采用下列定义。 微生物菌种资源 anism resources 指可培养的有一定科学意义、具有实际或潜在实用价值的古菌、细菌、真菌、病毒、细胞株等及其相关信息数据。 菌种保藏 culture preservation 是指将微生物菌种用各种适宜的方法妥善保藏, 避免死亡、污染, 保持其原有性状基本稳定。 定期移植保藏法 subculturing 亦称传代培养保藏法, 包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中, 最适条件下培养, 待生长充分后,于4℃-6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。 液体石蜡保藏法 preservation under liquid paraffin 亦称矿物油保藏法, 定期移植保藏法的辅助方法。是指将菌种接种在适宜的斜面培养基上, 最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡, 使其覆盖整个斜面, 再直立放置于 4℃- 15℃进行保存的一种菌种保藏方法。 沙土管保藏法 sand preservation 亦称载体保藏法。是指将培养好的微生物细胞或孢子用无菌水制成悬浮液, 注入灭菌的沙土管中混合均匀, 或直接将成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中, 使微生物细胞或孢子吸Ⅶ 6 附在载体上,将管中水分抽干后熔封管口或置干燥器中于 4℃- 15℃进行保存的一种菌种保藏方法。 3 基本原则 应针对菌种特性选择适宜方法进行保藏。 应保证菌种保藏的安全性,不能对周围环境造成污染和危害。 4 方法 定期移植保藏法见附录 A。 液体石蜡保藏法见附录 B。 沙土管保藏法见附录 C。Ⅶ 7 附录A 定期移植保藏法 适用范围本方法适用于大多数细菌和真菌。 原理低温条件下保藏可减缓微生物菌种的代谢活动,抑制其繁殖速度,达到减少菌株突变, 延长菌种保藏时间的目的。保藏培养基一般含较多有机氮,糖分总量不超过 2% ,既能满足菌种培养时生长繁殖的需要,又可防止因产酸过多而影响菌株的保藏。 技术要求 不同菌种应根据要求选择合适的培养基。 接种时要求无菌操作,避免染菌。 保藏期间要定期检查菌种存放的房间、冷库、冰箱等的温度、湿度,各试管的棉塞有无污染现象,如发现异常应取出该管,重新移植培养后补上空缺。 大量菌种同时移植时,各菌株的菌号、所用培养基要进行核对,避免发生错误。 每次移植培养后, 应与原保藏菌株和菌株的登记卡片逐个对照,