文档介绍：台微生物菌种常规保藏技术规程(试行)《自然科技资源收集、整理、保存技术规程研究与制定》项目组二OO四年十二月十日目次前言 2引言 31范围 42定义 43基本原则 54方法 5附录A定期移植保藏法 6附录B液体石蜡保藏法 9附录C沙土管保藏法 11参考文献 13木规范由台建设项目提出。木规范起草单位:中国农业科学院土壤肥料研究所、中国食品发酵工业研究院、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所。木规范主要起草人:程池、李金霞、胡海蓉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、张月琴、陈敏等。引言微生物菌种常规保藏是一类重要的基本操作技术,广泛应用于科学研究、教学及生物技术产业,是保护微生物菌种资源的重要手段,是科研教学及生物技术产业正常运转的重要保障。木规程包括定期移植保藏法、液体石蜡保藏法和沙土管保藏法二种常用微生物菌种保藏方法。制定本规程是为了规范微生物菌种常规保藏技术操作,加强管理,以达到保护微生物菌种资源,利用微生物菌种资源及实现资源共享的目的。微生物菌种常规保藏技术规程1范围木规程规定了微生物菌种常规保藏技术的基木原则和方法。本规程适用于微生物菌种的常规保藏工作。2定义本规程采用下列定义。anismresources指可培养的有一定科学意义、具有实际或潜在实用价值的古菌、细菌、真菌、病毒、细胞株等及其相关信息数据。,避免死亡、污染,保持其原有性状基本稳定。,包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中,最适条件下培养,待生长充分后,于4"C—6C进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。,定期移植保藏法的辅助方法。是指将菌种接种在适宜的斜面培养基上,最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入火菌的液体石蜡,使其覆盖整个斜面,再直立放置于4°C-15°C进行保存的一种菌种保藏方法。。是指将培养好的微生物细胞或泡了用无菌水制成悬浮液,注入火菌的沙土管中混合均匀,或直接将成熟饱了刮下接种于灭菌的沙土管中,使微生物细胞或泡了吸vn附在载体上,将管中水分抽干后熔封管口或置干燥器中于4°C-15°C进行保存的一种菌种保藏方法。3基本原则1应针对菌种特性选择适宜方法进行保藏。,不能对周围环境造成污染和危害。。2液体石蜡保藏法见附录B。。附录A定期移植保藏法1适用范围本方法适用于大多数细菌和真菌。2原理低温条件下保藏可减缓微生物菌种的代谢活动,抑制其繁殖速度,达到减少菌株突变,延长菌种保藏时间的目的。保藏培养基一般含较多有机氮,糖分总量不超过2%,既能满足菌种培养时生长繁殖的需要,又可防止因产酸过多而影响菌株的保藏。。,避免染菌。、冷库、冰箱等的温度、湿度,各试管的棉塞有无污染现象,如发现异常应取出该管,重新移植培养后补上空缺。,各笛株的菌号、所用培养基要进行核对,避免发生错误。,应与原保藏菌株和菌株的登记卡片逐个对照,检杏无误后再存放。,防止因意外和污染造成损失。,如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等,根据不同情况洗涤、干燥、包装、火菌后使用。,按培养基配方称取各项材料,依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解,最后加足水量。,根据要求加稀酸或稀碱调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌,防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。,如琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中,加热并不断搅拌至融解,再补足所蒸发水分。,将配好的培养基趁热过滤并分装,斜面培养基不宜超过试管高度的四分之一。分装过程中勿使培养基沾污管曰,以免弄湿棉塞造成污染。,外面包扎一层牛皮