文档介绍：人脐带间充质干细胞移植改善化疗损伤卵巢功能的实验研究课题来源:自选学位申请人导师答辩委员会主席姚书忠王沂峰谢梅青教授宗利丽主任医师月广州专名称指教答辩委员会成员妇产科学朱少芳何援利教授教授罗新张晓薇姜晓丹论文评阅人刘国炳教授业南方医科大学级博士学位论文
人脐带间充质干细胞移植改善化疗损伤卵巢功能的实验研究疘疘/博士研究生:朱少芳指导教师:何援利教授摘要、研究背景:随着恶性肿瘤化学治疗的进展,很多患者可以长期存活,有的甚至可以完全治愈。然而这些女性患者在化疗后,都不同程度地出现了月经失调、轻重不等的卵巢功能衰竭并导致不育。其中,最常见的是卵巢功能早衰琍V饕1硐治Sτ没埔┪锖蟪鱿钟谰眯员站蜕称鞴萎缩,并伴有卵泡刺激素畇現痛倩铺迳伤琇升高、雌激素,档偷淖酆险鳎鱿治Ь经期综合征症状,如潮热、多汗、面部潮红、情绪不稳定、性欲低下、阴道干涩等,甚至不孕。目前,对化疗所致的卵巢早衰的机制还不是很明确,岢鱿赴亡是化疗药物引起卵巢结构及功能破坏的重要机制。受化疗药物影响,卵泡内的一些特定的信号被激活而促使细胞发生凋亡,抑制此过程就有可能抑制凋亡从而保护卵巢功能。餐ü芯糠⑾只坪舐涯赶赴牡蛲隹赡苁怯缮经酰胺和姿崆拾贝冀榈嫉摹I窬0纷魑R恢智手喾肿釉诘蛲鲋衅鹱判号传递的作用。匀狈Σ窬0返拿讣此嵝陨窬字傅男∈笥τ凋亡抑制剂磷酸鞘氨醇治疗发现可抑制化疗药物阿霉素造成的卵细胞的凋亡。此外还有化疗药导致卵巢组织纤维化和自身免疫等因素存在。近年来,人们纷纷采取各种方法来预防或治疗化疗性卵巢早衰,如采用促性腺激素释放激素激动剂和化疗博士学位论文
药物合用来治疗疭病、乳腺癌和其他恶性肿瘤,或狼疮性肾病的病人,可显著地降低幸存者中发生谋嚷省;褂醒д咛岢霾捎美涠潮4婕际酰括冷冻胚胎、冷冻卵巢组织移植及冷冻卵母细胞和体外成熟等,但均不尽人意。随着干细胞的研究逐渐深入,我们课题组对骨髓间充质干细胞珺瘟坡殉苍缢ソ辛搜芯浚峁发现大鼠骨髓间充质干细胞的卵巢移植对于治疗化疗所致的卵巢早衰有明显的治疗作用,表现为大鼠卵巢各级卵泡数增加,雌二醇浓度明显上升,ǘ明显下降,表明苄薷绰殉步峁梗纳坡殉材诜置诠δ埽黄浠瓶悸怯芊置谘9苣谄は赴ひ蜃,胰岛素样生长因子一,⒏蜗赴ひ蜃,等因子,抑制卵巢颗粒细胞凋亡有关。但由于嬖诓《尽⑾妇廴镜目赡埽踊苹颊吖撬柚刑崛〉奈食渲矢上赴在的致瘤的可能性较高,而且随着患者年龄增长其细胞数量和扩增、分化能力出现明显下降趋势,使研究和应用受到限制。因而,来源于胎儿附属器的脐带间充质干细胞和胎盘问充质干细胞由于其取材容易,不会对患者造成二次损伤,病毒和细菌的污染率低,免疫原性低等特点,有可能成为更好的替代细胞。因此,我们选择了对人胎盘和脐带中提取的间充质干细胞进行比较,并根据其细胞学特性选择合适的替代细胞。在选定了替代细胞后,通过在体外建立化疗性卵巢早衰的大鼠模型,昙窍赴蠼新殉沧⑸湟浦埠臀簿猜鲎射移植,荧光显微镜观察人脐带间充质干细胞移植后的卵巢情况,检测大鼠、乃胶鸵醯劳科母谋洌峙看λ来笫螅鄄齑笫蟮牟±碜橹谋洌包括卵巢染色观察组织形态学变化和卵泡计数,荧光显微镜观察间充质干细胞存活的情况和间充质干细胞位置,并观察各组大鼠的生育情况和后代的生长发育情况,从而探讨在化疗性卵巢早衰中最适合的间充质干细胞来源和最适合的移植方式。中文摘要Ⅱ
第一章人脐带及胎盘间充质干细胞的选择性应用研究方法:目的:建立人脐带间充质干细胞和胎盘问充质干细胞在体外分离、培养的方法,并对其进行鉴定;检测人脐带及胎盘来源的间充质干细胞的生物学特性,进行比较研究;研究人脐带和胎盘来源的间充质干细胞内部和表面的超微结构,进行对比研究。蘧跫绿崛∑使錾慕】底阍滦律钠甏吞ヅ蹋似甏充质干细胞采用贴壁法,胎盘问充质干细胞采用胶原酶消化结合贴壁法进行原代培养,置培养液ヌヅQG中培养,待细胞融合到%~%时,传代。采用流式细胞仪检测两种细胞的表面标志,通过检测抗人、等对细胞进行鉴定,光镜下观察细胞形态。,染色法测定细胞周期,细胞凋亡检测试剂盒狥检测凋亡情况,实时荧光定量反转录聚合酶链式反应狿检测两种间充质干细胞的血管内皮细胞生长因子,⒗嘁鹊核厣ひ蜃猯,、肝细胞生长因子的信使琺表达情况,酶标记免疫吸附测定法珽礗ㄕ饬街旨涑渲矢上赴腣、置谇榭觥干涞缇导觳獾代脐带及胎盘来源的间充质干细胞的内部结构,同时采用原子力显微镜检测其表面结构。博士学位论文猯、、、.,
结果:嘌奶ヅ碳捌甏丛吹募涑渲矢上赴L谙赴赴仕形,有胞浆突起,为成纤维细胞样,胞浆丰富,核大,呈平行排列或旋涡状生长,漩涡中心细胞多层分布。传代后细胞生长迅速,待铺满全层后可稳定传代。所提取的间充质干细胞表达、、、徊槐泶顲煅8上赴乖、紫赴餐乖、和瓺,提示所得贴壁细胞为人间充质干细胞,表达间充质干细胞特异性抗原标志