文档介绍：一、液-固色谱原理液—固色谱就是基于吸附与溶解性质得分离技术,柱色谱属于液—固吸附色谱。当混合物溶液加在固定相上,固体表面借各种分子间力(包括范德华力与氢键)作用于混合物中各组分,,当流动相流过固体表面时,混合物各组分在液-固两相间分配。吸附牢固得组分在流动相分配少,,吸附弱得组分以较快得速率向下移动。随着流动相得移动,在新接触得固定相表面上又依这种吸附—溶解过程进行新得分配,新鲜流动相流过已趋平衡得固定相表面时也重复这一过程,结果就是吸附弱得组分随着流动相移动在前面,吸附强得组分移动在后面,吸附特别强得组分甚至会不随流动相移动,各种化合物在色谱柱中形成带状分布,实现混合物得分离。 二、柱色谱分离条件(1) 。以氧化铝作为固定相时,非极性或弱极性有机物只有范德华力与固定相作用,吸附较弱;极性有机物同固定相之间可能有偶极力或氢键作用,有时还有成盐作用。这些作用得强度依次为:成盐作用〉配位作用〉氢键作用>偶极作用> 范德华力作用。有机物得极性越强,、硅胶、活性炭等(表1). 色谱用得氧化铝可分酸性、中性与碱性三种。酸性氧化铝pH约为4~4、5,用于分离羧酸、氨基酸等酸性物质;中性氧化铝pH值为7、5,用于分离中性物质,应用最广;碱性氧化铝pH为9~10,用于分离生物碱、***与其它碱性化合物等。吸附剂得活性与其含水量有关。含水量越低,活性越高。脱水得中性氧化铝称为活性氧化铝。硅胶就是中性得吸附剂,可用于分离各种有机物,。吸附剂得粒度越小,比表面越大,分离效果越明显,但流动相流过越慢,有时会产生分离带得在重叠,适得其反。(2)。 在色谱分离过程中混合物中各组分在吸附剂与展开剂之间发生吸附-溶解分配,强极性展开剂对极性大得有机物溶解得多,弱极性或非极性展开剂对极性小得有机物溶解得多,随展开剂得流过不同极性得有机物以不同得次序形成分离带。在氧化铝柱中,选择适当极性得展开剂能使各种有机物按先弱后强得极性顺序形成分离带,流出色谱柱。当一种溶剂不能实现很好得分离时,选择使用不同极性得溶剂分级洗脱。如一种溶剂作为展开剂只洗脱了混合物中一种化合物,对其它组分不能展开洗脱,。三、柱色谱分离操作(1)柱色谱装置柱色谱装置包括色谱柱、滴液漏斗、,后者只用于水做展开剂得场合。色谱柱下端配有旋塞,色谱柱得长径比应不小于7~8:1。(2)分离操作①装柱:色谱柱得装填有干装与湿装两种方法。干装时,先在柱底塞上少许玻璃纤维,再加入一些细粒石英砂,然后将准备好得吸附剂用漏斗慢慢加入干燥得色谱柱中,边加入边敲击柱身,务必使吸附剂装填均匀,不能有空隙。吸附剂用量应就是被分离混合物量得30~40倍,,在吸附剂上覆盖少许石英砂。湿装时,将准备好得吸附剂用适