文档介绍：小鼠双氢睾***(DHT)试剂盒使用方法检测范围: 96T1nmol/L-40nmol/L使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中双氢睾***(DHT)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠双氢睾***(DHT)水平。用纯化的小鼠双氢睾***(DHT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入双氢睾***(DHT),再与HRP标记的双氢睾***(DHT)抗体结合,形成抗体■抗原•酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品屮的双氢睾***(DHT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠双氢睾***(DHT)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品(80nmol/L),提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20°C保存,但应避免反复冻融不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。40nmol/L5号标准品150pI的原倍标准品加入150卩1标准品稀释液20nmol/L4号标准品150(11的5号标准品加入150^11标准品稀释液10nmol/|11标准品稀释液5nmol/L2号标准品150』)11标准品稀释液加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50川,待测样品孔中先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品10卩1(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后置37°C温育30分钟。配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸锢水30倍稀释后备用洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50gl,空白孔除外。温育:操作同3。&洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50|il,再加入显色剂B50yl,轻轻震荡混匀,37°:每孔加终止液50)11,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:准备试剂,样品和