文档介绍：各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法一,基因组DNA提取方法制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤,通常要求得到的片段的长度不小于100-200kbo在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法,其他的方法还冇1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。2化学方式:异硫亂酸脈法碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤:1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。试验步骤2再重新作一边。3、加入5mlDNA提取缓冲液,(10mmol/LTris-%SDS)混匀。4、加入25ul蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml混匀,50°C水浴3h5、用等体积的酚抽提一次,25OOrpm离心收集水相,用等体积的(酚,氯仿,异戊醇)混合物抽提-次,2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿,异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL混匀,冰浴,lOmin.。7>。加入等体积的界丙醇。室温lOmino2500ipm离心lOmin«弃上清。8、加入0」倍体积3mol/L乙酸钠()与2倍体积・20°C预冷无水乙醇。.20°C20min。9、12000r/min室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适最TE屮。二,外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法:试验步骤:1、取人肘静脉血5nil,EDTA抗凝,2500rpm离心lOmin。2、小心吸取上层血浆,。3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液,摇匀,冰浴15miric4、2500rpm离心lOmin,弃上清。5、加入10ml溶血液,摇匀,冰浴15min06、3000rpm离心lOmin,弃上清。7>倒置离心管,去掉残液。8、得白细胞,一80°C冻存。试验要求:血至分离白细胞Z间隔时间在室温下放置不超过2h,4°C放置不超过5h,以防白细胞口溶。三,氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA:试验试剂:Ligsisbuffer: 133mMNH4C1NHC17」」;最后加灭菌去离子水至l()()Oml,高压灭菌。ACD抗凝剂: ;敲后加灭菌去离了水至350ml,高压灭菌。提取缓冲液(Extractionbuffcr):10mMTrisCl(PH=)(PH=)lml0」mMEDTA(PH=)(PH=)%SDS10%;授后灭去离了水至100ml,高压灭菌试验步骤:1、在500»1抗凝血屮加入ligsisbufferlOOOpl,充分颠混至清亮。以4OOOrpm,离心5min<>弃上清液。2、沉淀中加入ligsisbuffer1500pl,充分匀浆。以6000rpm,离心5mino3、彻底弃去上清,加入cxtractionbuffcr500pl(裂解细胞),混匀置于3TC,水溶lh。4、加入8pl的蛋