文档介绍：蛋白质沉淀分离技术的应用1133120106 封义嘉应用化学1101B班摘要蛋白质作为功能性物质常存在于复杂的混合体系中因此需要将其从原料中分离纯化蛋白质是一种不稳定的有机高分子物质。蛋口质的沉淀分离在我们的现实中,生产生活中具有很大的意义关键词蛋口质分离沉淀蛋白质(protein)是生命的物质基础,没有蛋白质就没有生命。因此,它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%〜20%,〜12kg。人体内蛋口质的种类很多,性质、功能各异,但都是由20多种氨基酸按不同比例组合而成的,并在体内不断进行代谢与更新。一,蛋白质的沉淀分离1、蛋白质的盐析中性盐对蛋口质的溶解度有显著影响,…般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析,将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子(如硫酸镀的S04和NH4)有很强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之“失水”,于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同,故盐析所需的盐浓度也不一样,因此调节混合蛋口质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋口质分段沉淀盐析沉淀法在实验研究中有广泛的应用,如小牛胸腺末端脱氧核昔酰转移酶的分离纯化、磷酸酪氨酸蛋白专一抗体的纯化、雪旺细胞分泌神经营养蛋口的提纯、I-型胶原蛋口的提纯、红茶抗菌蛋白纯化、褐云玛瑙螺蛋白腺中糖蛋白分离纯化等。但这种方法需要用大量的无机盐,大规模使用会造成环境污染,为此需要进行复杂的污水处理。2、等电点沉淀法蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小,因而溶解度也最小,各种蛋白质的等电点有差别,可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀,如在硫酸鞍沉淀中那样相互作用,形成聚集体。实际操作中,当蛋白等电沉淀所需pH值与提取缓冲液的pH值相差甚远时,等电沉淀也能进行。如碱性蛋白质可在酸性条件下溶解并在较高pH值条件下沉淀。具有中性等电点的蛋白质虽在中性pH值附近的缓冲液中能溶解,但很难或不可能用中性等电点来沉淀蛋白质,此吋通过蒸憎水透析可沉淀这种蛋口。等电沉淀在适宜条件下也可用于高纯度生物大分子的制备等3、低温有机溶剂沉淀法用与水可混溶的有机溶剂,甲醇,乙醇或丙酮,可使多数蛋白质溶解度降低并析出,此法分辨力比盐析高,但蛋白质较易变性,应在低温下进行4亲和沉淀法这种新方法既有亲和层析的优点,乂更简便。原理是含敏感促进因子的亲和高分子材料与分离目标蛋白在其均相溶液中形成复合物,改变pH值、温度或离子强度,使复合物沉淀并对其进行解离,则亲和高分子材料分离出去,得到目标蛋口。亲和性的热沉淀高分子能很简便地分离制备蛋白。如将1%的亲和性热沉淀高分子材料与含有溶菌酶和卵清蛋口的溶液混合,20°C下孵化16h,孵化过程中维持搅拌,使其与蛋白形成复合物,然后将温度升至沉淀临界点,析出沉淀,离心分离,再将沉淀溶解在稀的醋酸溶液中,升高温度至临界析出点,将亲和性的热沉淀高分子沉淀出来,离心去除这些沉淀物就能得到溶菌酶和卵清蛋白。二应用盐析法,在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出,这