文档介绍：几种菌种的保存及复方法(含扩增方法)定期移植法,亦称传代培养保藏法,包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中,最适条件下培养,待生长充分后,于4~6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。操作步骤如下:,如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等,经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。,按培养基配方称取各项材料,依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解,最后加足水量,搅拌均匀。,根据要求加稀酸()或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌,防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。,如琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中,加热并不断搅拌至融解,再补足所蒸发水分。,将配好的培养基趁热过滤并分装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4~5mL),穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装过程中勿使培养基沾污管口,以免弄湿棉塞造成污染。,外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。,通常蒸汽灭菌为121℃,15~20min。,斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。,通常30℃培养1~3天。无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。。适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌(如毛霉、根霉等)。。适用于细菌和酵母菌等。“之”字形线。适用于易扩散的细菌,也适用于部分真菌。“之”字形线。能充分利用斜面获得大量菌体细胞,适用于细菌和酵母菌等。,转接到新鲜斜面上。适用灵芝等担子菌类真菌。,从柱状培养基中心自上而下刺入,直到接近管底(勿穿到管底),然后沿原穿刺途径慢慢抽出接种针。适用于细菌和酵母菌等。。3培养将接种后的培养基放入培养箱中,在适宜的条件下培养至细胞稳定期或得到成熟孢子。细菌培养温度一般为30~37℃,真菌培养温度一般为25~28℃。4保藏培养好的菌种于4~6℃保存,根据要求每3~6个月移植一次。某些菌种,如芽裂酵母,阿舒假囊酵母,棉病囊霉等,须1~3个月移植一次。保藏湿度用相对湿度表示,通常为50%~70%。斜面菌种应保藏相继三代培养物以便对照,防止因意外和污染造成损失。液体石蜡保藏法亦称矿物油保藏法,定期移植保藏法的辅助方法。是指将菌种接种在适宜的斜面培养基上,最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡,使其覆盖整个斜面,再直立放置于低温(4~6℃)干燥处进行保存的一种菌种保藏方法。操作步骤如下:1液体石蜡的准备选用优