文档介绍：高温蛋白酶产生菌株的筛选一、实验目的 1. 学****从各种样品中分离微生物的操作技术 2. 掌握分离微生物时定性测定产物的筛选方法 3. 掌握高产蛋白酶菌株的初筛方法二、基本原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有:平板分离法:该方法操作简便,普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理包括两方面: 1. 选择适合于待分离微生物的生长条件,如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长,而抑制其他微生物生长的环境,从而淘汰一些不需要的微生物。 2. 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此,纯培养的确定除观察其菌落特征外,还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定, 有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。土壤是微生物生活的大本营,它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所,是发掘微生物资源的重要基地,可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。三、实验材料 1. 样品: 从地表下 10~15cm 的土壤或者枯枝烂叶、腐烂稻草中用无菌小铲、纸袋取土样, 并记录取样的地理位置、 pH 、植被情况等。(学生自取) ①肉汤培养基(附录Ⅱ- ): 100 mL/ 组,其中 20 mL 液体培养基/250 mL △中(内装玻璃珠 10颗); 50 mL 固体斜面培养基分装在试管中: 5mL/ 支, 10支。组成: 牛肉膏 % 蛋白胨 1% NaCl % pH ~ 121 ℃,灭菌 20min ②酪素培养基(附录Ⅱ- ): 200 mL/500 mL △×1( 10-12 个平板,每组 6 个平板)组分 KH2PO4 MgSO4 · 7H2O ZnCl2 Na2HPO4 · 7H2O NaCl CaCl2 FeSO4 * 酪素 Trypticase 琼脂配方要求(%) 母液浓度(%) 5 4 各成分的取量( mL ) /200ml 2222222 202* 酪素的母液浓度为 4% ,是将 4g 干酪素溶解于 的 30-35ml 的 NaOH 水溶液中,水浴溶解 20min ,待溶解完全后加入 60-70 ℃热水稀释到所需浓度(即定容到 100 mL ) ,即得到母液浓度围 4% 的酪素溶液。各组分的母液由老师配制好,学生按照 200ml 的体积直接取样加入即可。 pH ~ , 121 ℃,灭菌 20min , 倒好平板后进行无菌检查。③生理盐水: % NaCl 水溶液, 9 mL/ 支× 10支④其他:平皿 10套、温度计、水浴锅、移液管、显微镜、涂布器 2个,三角瓶( 250mL , 500 mL 规格)、革兰氏染色液等。四、实验内容 10~ 15c