文档介绍：青岛大学
博士学位论文
HCMV感染神经瘤细胞对其神经生长因子和受体表达影响的研究
姓名:王海涛
申请学位级别:博士
专业:病原生物学
指导教师:王斌
20090603
1
2
感染对神经瘤细胞神经生长因子及其受体表达影响的研究摘要研究背景:人类巨细胞病毒琀属于疱疹病毒科,是最为常见的先天性中枢神经系统感染的病原体。在先天性感染的胎儿中大约有ピ诔錾笨杀硐治Q现氐纳窬运鹕耍缧⊥坊渭笆抑芨苹取F裎V梗先天性感染引起神经系统损伤的细胞和分子机制尚未阐明。研究已经证明,神经生长因子,与受体的表达及其相互作用与神经细胞的牛长发育、分化和凋亡等密切相关。体外培养神经细胞的过程中,在培养基中停止添梢杂盏枷赴蛲龌蛩劳觥<诖耍颐峭撇猓感染可能通过改变褪芴宓谋泶锼蕉跋焐窬赴恼P翁凸能,导致细胞凋亡,是感染致神经系统损伤的机制之一。目的:芯縃腥径蕴逋馀嘌纳窬褐柿鱿赴蜕窬赶赴鱿赴蛲龅挠响;芯縃腥径蕴逋馀嘌纳窬褐柿鱿赴蜕窬赶赴鱿赴鸑及其受体转录及表达的影响,以探讨致神经系统病变的可能机理。材料和方法:瓾毒株制备及滴度测定:用局旮腥救伺叻味短逑赴待细胞病变超过%时收取绌胞,反复冻融取上清,。采用病毒空斑定量的方法,倒置显微镜观察,计数空斑数并计算病毒滴度。肏腥救松窬褐柿鱿赴腥旧窬鱿赴螅的方法检测基凶的表达水平。倒置显微镜下观察细胞形态学变化:中文摘要
3
流式细胞仪检测,观察感染对神经胶质瘤细胞凋亡的影响。逋馀嘌鳸赴赴腥静《竞髄、和焓栈裣赴J笛樽椋同时收获正常细胞为对照组,半定量检测细胞内淖B妓剑庖哂光法和检测细胞鞍椎谋泶锼健逋馀嘌松窬赶赴鱿赴.⒏腥綡术螅捎妹疫荧光法检测和蛋白的表达。,流式细胞仪检测感染对神经母细胞瘤细胞凋亡的影响。:瓾直鸶腥救松窬赶赴鱿赴腿松窬褐柿鱿赴天后,可见细胞形态有明显变化,细胞突起逐渐萎缩变成球形细胞,旌蟛”涓用飨裕赴大部分变成圆形、椭圆形,胞体及胞核增大,胞质混浊,细胞透光性降低。焓可见所有感染细胞均发生类似病变。甊姆椒ḿ觳釮基因的表达用于证实感染细胞,成功建立了神经胶质瘤细胞的感染模型。病毒感染旌笙赴廾飨员浠感染旌笙赴贕遄蟛喑鱿忠桓鲅嵌短逑赴旱姆亚峰,即凋亡峰感染旌笙赴蛲龇迕飨浴2《靖腥竞笙赴⑸蛲觯宜娌《靖腥臼奔涞难映ぃ细胞凋亡明显增加。感染后旌天的细胞凋亡率分别为%《靖魇奔涠蜰的产物电泳带平均灰度比值、、无明显变化直鹞..琌..蚈..,与对照平均灰度值..《骄叶比值..ü夂蚖结果显示,细胞感染病毒后天,细胞内的表达没有出现明显变化,在第鸪鱿置飨韵碌鳌庖哂ü饧觳釮和基冈的表达,。病毒感染旌笙赴廾飨员浠腥天后细胞出现一个凋亡峰,感染天后细胞凋亡峰明显。%。青岛大学博士学位论文
4
博士研究生王海涛≡,细胞内谋泶锍鱿窒升高后降低的变化;其受体蛋白的表达随着感染时间的延长明显上调。结论:窬褐柿鯱赴蜕窬赶赴鯯甋赴荋娜菪硐胞;瓾腥究煞直鹩盏继逋馀嘌纳窬褐柿鱿赴蜕窬赶赴龇⑸亡:瓾腥究煞直鹣碌魈逋馀嘌纳窬褐柿鱿赴蜕窬赶赴瞿谠葱蜃B己偷鞍妆泶铮煌笨缮系魃窬赶赴鱿赴芴錚鞍椎谋泶铩关键词:神经胶质瘤细胞;神经母细胞瘤细胞;巨细胞病毒;神经生长因子;神经生长因子受体;细胞凋亡甒课题来源:国家自然科学基金支持;山东省“病原生物学”泰山学者工程资助项目中文摘要
5
甌青岛大学博士学位论文琣瓵,,畇琩:瓾瓵加甶‘:.甌,..
6
和.±,±.,.—瓵—,,痭,瑂%,%.±,—瓸觱·瓽瓸,,..瑃,畉甆,:
7
青岛大学博士学位论文瓾瑆猄..篻琻,,,籑··—/瓵篘
8
论文作者龋壶谶论文作者签名:王涵滔不保密弋/导师躲日期:絝月日期:如咿‘月艏冢贺婪酢缕学位论文独创性声明学位论文知识产权权属声明本人声明,所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。文中依法引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。本人如违反上述声明,愿意承担由此引发的一切责任和后果。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的耿务作品,知识产权归属学校。学校享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请热ɡ1救死胄后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为青岛大学。本学位论文属于:保密口,在年解密后适用于本声明。朐谝陨戏娇蚰诖颉啊獭旧鞯陌嫒ü榍嗟捍笱校淳砜桑魏蔚ノ患叭魏胃鋈瞬坏蒙米允褂
9
言引人巨细胞病