文档介绍：δ艿某醪窖芯考捌相互作用蛋白的鉴定课题来源:
㈣豫δ艿某醪窖芯考捌湎嗷作用蛋白的鉴定硕士研究生:李涛指导教师:姜勇教授摘要年,虰首先发现,在赴颂崛∥镏杏幸恢帜苡朊庖球蛋白的轻链编码基因的增强子瓸序列”盯匾旖岷系暮说白因子,称之为—琋Q芯糠⑾郑琋畆调节的靶基因编码蛋白至少包括细胞因子、趋化因子、生长因子、转录因子、粘附分子、免疫受体、氧化应激相关酶以及急性期蛋白等。通过调节靶基因表达产物,.瓸信号通路参与了感染、炎症、免疫反应、细胞凋亡和肿瘤等病理过程以及细胞周期调控与细胞分化等。核因子种频鞍,.是核因子囊种埔蜃印为墓俜交蛎W魑狽猺抑制物,訬畆的激活失活有着重要的调节作用。在生理状态下,。,被遮盖,因而不能转位入核调控基因的转录翻译,处于无活性状态。当细胞受到合适的胞外信号如,、甉琓.∞、某些变应原等多种因素的刺激时,引起一系列连锁的酶促反应。首先涣姿峄婧笥直环核鼗核鼗腎由于空间构象发生变化,被览敌的蛋白酶体识别并降解。当坏硕士学位论文—
在本研究中我们首躲用双荧光素酶报告基因系统甃白酶体降解后,.就被释放出来,在其核定位序列榈枷伦N坏较胞核内,与靶基因上的位点发生特异性结合,调控相关基因的转录。让人们感兴趣的是,蚱舳右泊嬖贙蛄校虼薔畆可调控基因的表达。,⑹蛊渚奂细胞浆中。⑹Щ罹哂重要作用。,而对其转录后调控的机制涉及不多。在真核细胞内,转录和翻译过程发生于不同的部位,使得遗传信息从流向蛋白质的过程中,可以在多点实现基因表达的调控,以调节细胞内的蛋白表达水平。已有的研究表明:基因转录后调控主要包括在细胞中的定位、稳定性及其翻译效率,相关的调控元件多位于转录本的非翻译区琔,其中尤以更为重要。因此,深入研究骺鼗虮泶锘频慕兄谖颐歉玫慕沂净迳动的奥秘。大量的研究表明:一类被称之为岷系癐兰産的调节因子在基因的转录后调控起着非常重要的作用。岷系鞍资且焕嘣生物进化过程中高度保守并在生物体内广泛存在的蛋白,、编辑、运输、稳定性和降解、翻译等基因转录后调控过程。因此,鉴定出与、特别是其岷系腞结合蛋白,对于阐释该基因表达的转录后调控,蛋白水平的变化等过程有着重要的意义。综上所述,我们认为通过对功能的初步研究和与其相互作用的岷系鞍椎募ǎ兄诮沂綨虮泶锏淖B己蟮骺鼗制,促进我们对—瓸信号通路调控机制的进一步了解。,研究了墓δ堋T贒检测中,我们将的疷序列克隆至载体中荧光素酶报告基因的下游笔褂煤Iü馑孛缸魑D诓危以消除不同转染组之间因转染效率和细胞生存环境不同带来的实验误差。经双中文摘要和琑
晓间存在相互作用,而共表达驪芟灾碌髌渖嫌蔚挠ü馑孛副控基因表达的顺式调控元件。进一步采用技术鉴定了与嗷プ饔玫腞结合蛋白。我们首先通过体外转录的方法合成了生物素标记的腞探针,,,将获得的蛋白条带切下进行质谱ā经质谱鉴定和数据库搜索,我们得到个蛋白质,包括、取N颐窍嘈耪庑┑鞍椎姆⑾治=沂墓δ芤约敖徊浇舛罭畆疘藕磐返牡骺鼗铺峁┝新的线索以及潜在的调控分子。根据查找文献和数据搜索发现一个剪切体组件在甿羟泄讨邪缪葜匾=巧ǎ币部傻骺啬承┗的稳定性。鉴于厥獾牡鞍捉峁辜捌湓谥诙嗷蜃B己调控方面的重要性,我们选取魑O乱徊窖芯康暮蜓〉鞍住最后,我们对疷之间的相互结合及其生物学功能作了进一步的研究。结果显示,┙峁确实存在着相互作用,并艽俳基因的表达。同时,、、、,,猯、、、、勺魑如甪明,猵猺、、、、
龊蜓〉鞍字醒∪「靖誂调控密切相关的谋泶铮⑾指哉兆橄啾龋扇抛镹腎】疉水平显著降低,提示谙赴锌赏ü隢疷的相互结合而参与了对基因的转录后调控。总之,我们通过双荧光素酶报告基因检测系统发现写嬖诟调控基因表达的调控元件,并进一步通过技术结合疶质谱鉴定了与嗷ソ岷系牡鞍字剩叶云渲械腍鞍捉辛顺醪降姆治觥1狙芯咳〉萌缦陆峁晒菇╬荧光素酶报告基因表达载体,并采用双荧光素酶报告基因检测系统研究发现曰虻谋泶锲鸶旱骺刈饔谩肂方法得到与嗷プ饔玫牡鞍复合物。,并经质谱鉴定得到与嗷プ饔玫龊蜓〉鞍字史肿