文档介绍：第一军医大学
博士学位论文
儿童急性白血病mdr1基因及其编码Pgp表达和功能的研究
姓名:邹亚伟
申请学位级别:博士
专业:儿科学
指导教师:封志纯
20060506
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儿童急性白血病基因及其编码表达和功能的研究博士研究生邹亚伟指导教师封志纯摘要一、研究背景急性白血病细胞对抗癌药物的耐药是目前患儿化学治疗失败、疾病复发的一个主要根源。根据细胞耐药谱的不同,可分为原药耐药,和多药耐药,。羌毙园籽病患儿一种主要形式的耐药,它有两种类型:籽2∠赴谥瘟频某跏冀锥就对多种化疗药物产生耐药,为内在耐药或原发耐药:籽2∠赴跏级曰疗药物敏感,但是经过几个疗程化疗后,肿瘤细胞对多种化疗药物产生耐药,称之为获得性耐药。从首次发现笾两瘢嗉谭⑾至瞬鶰的许多重要机制,现在普遍认为牟嵌嘁蛩亍⒍嗷谱酆献饔玫慕峁0籽2细胞经典的耐药机制涉及到,岷虾型膜载体蛋白家族。膜转运蛋白包括惶堑鞍,⒍嘁┠鸵┫喙蛋白⒎文鸵┑鞍和乳癌耐药蛋白等几类,。它们在细胞膜上起着外排泵的作用,能将细胞内的有毒物质ㄒ物T顺鱿赴涸谄浔泶镌黾踊蚧钚栽銮渴保韵赴拘砸┪锏淖T俗饔迷强,导致药物在细胞内的累积减少,因而产生耐药性。猵既可降低药物流入,也可增加药物排出。易使肿瘤细胞产生经典囊┪锒辔L烊坏姆肿恿拷洗的亲脂性药物,如葸环类、长春碱类、鬼臼类等抗肿瘤药物。上述这些抗肿瘤药物均为儿童的常用化疗药物,因此研究白血病细胞的诙疉博士学住论文
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诊断、治疗评价和预后判断等方面有非常大的临床应用价值。编码猤幕蛭猰基因,人类蜃橛衜蚼W;蚨物实验证明,,共个外显子,其相应的序列在第罨灾湮?啥燎鹗济苈胱游狝。是由个氨基酸组成的单链跨膜糖蛋白,分子量受糖基化程度的不同而略有改变,通常为视殖芇蚶┰觥缺泶锸沟弥琢鱿赴鶰。表型最突出的特点是其编码的猤δ茉銮慷腗,因此是基因的表型标志。在人类中占主导地位的是表达的增加和/或转录的增加。但在儿童中自血病细胞的基因扩增、过度表达和其编码的的功能以及它们之间的相互关系等等,尚待进一步深入研究。二、研究目的τ眯滦蚆探针建立人类基因实时荧光定量—检测方法。芯縨猰贙赴岛推淠鸵┫赴礙疉细胞以及儿童白血病细胞中的表达。芯縨虮嗦氲腜诙疉籽2∠赴械谋泶锛捌涔δ堋三、实验方法死鄊蛴ü舛縋检测方法的建立用何锷计软件设计引物和探针,设计上游引物:下游引物:荧光探针甤甅.,以探针技术为基础,运用甅探针,以含有目的基因酗柿/Q粜模板,设立实时荧光定量从μ逑挡⒚髁朔从μ跫⑷死鄊荧光定量觳夥椒ā中文摘要和.、.一’
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归方程为芯縨甿诙煌嘈汀⒉煌制贏籽2∠赴械谋泶选择儿童病例共例,其中初治组例;难治复发组煌耆ɑ航个月~鲈组例;另外追踪随访了患儿例。选取正常对照组病例共例。在抽取骨髓或外周血标本后分离单个核细胞,然后抽提醋B后用实时荧光定量椒ḿ觳獍籽2∠赴鹠甿谋泶锪俊2⒕虯患儿初治组、难治复发组、—的表达量,,全部数据都作统计学处理。芯縨虮嗦氲腜—在儿童白血病细胞中的表达及其功能应用流式细胞术,临床标本用/杳欧ǎ《–捅泶锏摹较低的细胞群为要测定的白血病细胞群:对例初诊未治的病人选用猤タ隆抗体检测其白血病细胞的甮泶锪浚⒀芯糠从嘲籽2∠赴鸐功能的懦鍪笛楹桶籽2∠赴谌岷烀顾匦罨笛椤Q《ㄏ赴汉螅果取加或不加抑制剂环孢菌素钡腗戎琈疢。对标准细胞株作测定时,上机前用碘化丙啶作活细胞染色,设门于盤旧ò俜致ナ保俣寥∑渌ü庵怠四、研究结果蹦0宕┰鯠心康幕騧闹柿/阳性模板ǘ仍“’痬段保ü庑藕潘纬的标准曲线为一组典型的倒颓撸0迮ǘ扔肟杉觳獾接ü庑藕诺难肥呈良好的相关性,其决定系数为,循环阈值与模板浓度对数值的回。检测的最低稀释度为痬哪板,大约相当于检测最低限度为每个反应奖戳俊赴昙觳饨果为/琄疉细胞株为6哉兆椤⒉煌嘈秃头制贏榈膍猰泶镅粜月屎泶锼讲钜煊型臣蒲系南灾砸庖濉博士学位论文×/~痝。
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6哉兆例检测出.,./¨,较对照组升高。初治组与正常组阳性率比较:,.黄渲形皇冉蟲滴.,,说明初治患者与对照组相比,其—的表达阳性率和表达水平均较正常对照组升高,但在统计学上无显著性意义。阎胃捶⒆锳颊吖例,除毙粤馨拖赴籽2』级跣酝饩为阳性表达,白血病细胞—的表达阳性率和表达水平/掀渌髯榫摺1咀橛攵哉兆閙的表达阳性率和表达水平比较:,说明难治和复发的患者,其一的表达阳性率和表达水平升高均较正常组在统计学上有显著性意义。本组与初治组—的表达阳性率和表达水平比较:其中位数比较滴琍..,说明难治和复发的患者与初治的患者相比,