文档介绍：华中科技大学
博士学位论文
抗α1-肾上腺素能受体短肽抗体功能效应的研究
姓名:陈芬
申请学位级别:博士
专业:心血管内科
指导教师:廖玉华
2011-05-19
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华中科技大学博士学位论文
抗α1-肾上腺素能受体短肽抗体功能效应的研究
博士研究生:陈芬
研究生导师:廖玉华
华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科
中文摘要
第一部分
抗α1A-肾上腺素能受体短肽抗体的功能研究
目的:α1A-肾上腺素能受体是对血压维持和调节起着主导作用的α1-肾上腺素能受
体亚型,可能是降压靶点。然而,针对此亚型高度选择性的拮抗剂至今还缺乏。我们
旨在分析抗α1A-肾上腺素能受体短肽的特异性抗体的功能,为高血压治疗提供新策
略。
方法和结果:我们筛选出α1A-肾上腺素能受体胞外环 7-8 个氨基酸短肽 CP-7(位于
胞外第二环肽)以及 CPE-8(位于胞外第三环)。上述短肽与 KLH 偶联后免疫新西
兰大白兔以及自发性高血压大鼠。前者血清经过 50%饱和硫酸铵沉淀以及抗原肽段亲
和纯化浓缩后得到特异性抗肽抗体,分别命名为 Anti-CP-7 以及 Anti-CPE-8。蛋白免
疫印迹以及细胞免疫荧光证实此两个抗体均能与α1A-肾上腺素能受体特异性结合,
与α1B-以及α1D-肾上腺素能受体不存在交叉反应性。体外功能分析证实仅有 Anti
-CP-7 抗体可以显著性抑制苯肾上腺素刺激α1A-肾上腺素能受体引起的胞内钙升高,
蛋白激酶 C 活化,细胞外信号蛋白激酶磷酸化,以及抑制基础和苯肾上腺素刺激状态
下的心肌细胞搏动。与单独 KLH 免疫组相比,CP-7-KLH 免疫组在免疫过程的某个阶
段可以显著抑制自发性高血压大鼠血压升高,并与 Anti-CP-7 抗体滴度具有相关性。
上述体内外效应在 CPE-8 表位免疫组中均不显著。
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结论:我们研究证实 Anti-CP-7 能在体内外抑制α1A-肾上腺素能受体活性。我们的
实验方法可能成为缺乏特异性拮抗剂的α1A-肾上腺素能受体或者其他 G 蛋白偶联受
体的新策略。CP-7 表位可能是治疗高血压治疗的新靶点。
关键词:α1A-肾上腺素能受体;抗体;高血压
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第二部分
抗α1D-肾上腺素能受体短肽抗体的功能研究
目的:α1D-肾上腺素能受体是α1-肾上腺素能受体一种亚型,研究证实其参与维持
和调节全身血压,活性增高可以导致高血压的发生和发展,可能是高血压治疗新靶点。
然而其特异性拮抗剂目前还缺乏。我们旨在功能分析抗大鼠α1D-肾上腺素能受体胞
外第二环短肽的特异性抗肽抗体,提供高血压治疗新策略。
方法和结果:大鼠α1D-肾上腺素能受体胞外第二环短肽表位(CF-8)与 KLH 偶
联免疫新西兰大白兔以及自发性高血压大鼠。兔血清经过 50%饱和硫酸铵沉淀以及抗
原亲和纯化纯化出特异性抗肽抗体(Anti-CF-8),蛋白免疫印迹以及细胞免疫荧光证
实 Anti-CF-8 可以特异性结合大鼠主动脉血管环以及主动脉血管平滑肌细胞上α1D-
肾上腺素能受体;体外功能研究证实 Anti-CF-8 可以抑制苯肾上腺素刺激α1D-肾上
腺素能受体引起的蛋白激酶 C(PKC)移位,细胞外信号蛋白激酶(ERK)磷酸化,以
及细胞质钙离子浓度的瞬时升高;可以抑制苯肾上腺素刺激后主动脉血管环张力增
高。自发性高血压大鼠动物模型被用来进一步评价 Anti-CF-8 在体效应,与单独 KLH
免疫组相比,CF-8-KLH 免疫组整个免疫过程并没有显示出显著降压效果,其免疫后
Anti-CF-8 抗体滴度最高达到 1:3200。
结论:我们成功制备了一个可以体外特异性抑制α1D-肾上腺素能受体的抗体 Anti-C
F-8. 然而其在体降压效应不显著,需要进一步提升抗体滴度来评估其在体效应。
关键词:α1D-肾上腺素能受体;抗体;高血压;
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华中科技大学博士学位论文
Functional Analysis of Antibodies against Short Peptides of
α1-Adrenergic Receptors
: Chen Fen
Supervisor: Liao Yuhua
Institute Cardiovascular Disease Union Hospitol
Huazhong University of Science and Technology
Abstract
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