小鼠脾细胞悬液制备.doc

文档介绍：小鼠脾细胞悬液制备一、小鼠眼球取血(眼静脉取血)二、小鼠脾细胞悬液的制备: ,75%乙醇浸泡3分钟,取出小鼠置于无菌纸上,左腹侧朝上;,撕开皮肤,暴露腹壁,可见红色长条状脾脏;,剪开后上翻,暴露脾脏,用镊子提起脾脏,眼科剪分离脾脏下面的结缔组织,取出脾脏。放入盛有5mlHanks液的培养皿中;:梳刮法:脾脏可用镊子轻轻梳刮,避免将脾脏弄成碎片,将细胞悬液吸入离心管中,自然沉降5分钟,将悬液移至另一离心管中,弃去较大的组织块,离心沉淀细胞;B:钢网研磨法:将脾脏放置不锈钢网(100或200目)上,用注射器针芯轻轻研压脾脏,获细胞悬液;C:酶消化法:将脾脏用镊子夹碎,加入400u/ml胶原酶(III型)5ml/只脾脏,37度消化20分钟,用尼龙网过滤,得到单细胞悬液。 5、脾脏研磨:轻轻研压(顺同一方向),用吸管吸取脾细胞悬液,放入试管中。6、镜下细胞计数:40倍镜头,观察脾细胞。7、试取胸腺注:一般6-8周龄小鼠,根据品系不同,可得5-20×107细胞/只。:术前高压灭菌外,也可将手术器械泡在95%酒精的小容器中,使用前取出器械,在酒精灯上烧灼去除酒精,即可保证无菌,此法较为简便。如有侵权请联系告知删除,感谢你们的配合!