文档介绍：河北医科大学
硕士学位论文
姜黄素活化ARE通路对星形胶质细胞保护作用的研究及机制探讨
姓名:姜虹
申请学位级别:硕士
专业:神经病学
指导教师:田新英;李春岩
20090301
姜黄素活化范孕切谓褐氏赴;ぷ饔的研究及机制探讨摘要氧化应激是由活性氧族和活性氮族琑肭宄У引起。许多实验研究和对人脑的研究表明氧化应激介导了神经元的死亡并在神经变性疾病中发挥重要作用,如:肌萎缩侧索硬化珹⑴两鹕琍、阿尔茨海默病’I婕癛的氧化还原反应调节对于细胞正常功能的发挥尤其对于神经元和星形胶质细胞起到重要作用。过多损伤脂质、蛋白质、坝盏嫉蛲觥D壳把芯孔胖赜星形胶质细胞功能异常在神经变性疾病发生发展中的作用。活化的星形胶质细胞产生大量自由基并促进神经元凋亡;产生过多的一氧化氮和过氧化亚硝酸盐损伤线粒体并促进受体诱导的兴奋毒性作用。兴奋性氨基酸转运依赖位于星形胶质细胞和轴突间隙的高亲和力谷氨酸转运体对释放到胞外谷氨酸的迅速清除。盏嫉难趸鹕撕椭使氧化通过氧化转运体主要的巯基基团,抑制星形胶质细胞高亲和力谷氨酸转运体,干扰对胞外谷氨酸的摄取。活化的星形胶质细胞产生细胞因子使神经元对氧化应激的易损性增加。其中一些细胞因子,如:、產和罨中枢神经系统病变部位的死亡受体,这些受体对于神经变性疾病中神经元的丢失起到重要作用。中文摘要’琑
在运动神经元变性过程中牵涉到许多星形胶质细胞损伤机制,虽然这些机制都在运动神经元损伤的启动或发展中起作用,但并不是互相排斥而是可以被一个共同的反应所激活,这一共同的反应的协调者正是氧化应激。不断增加的氧化应激在导致运动神经元损伤的过程中,是出现较早且持久的事件。氧化应激在神经变性疾病发病中起到了突出的作用,并且它通过活化其它各个通路,引起更新一轮的氧化应激,促进了疾病的进展。内源性相解毒酶,如:劝彼岚腚装彼崃用复呋亚单位荆甮血红素加氧酶.,、乎氧化还原酶篞凸入赘孰腟转移酶等在保护细胞抵御氧化应激损伤过程中起到重要作用。许多神经变性疾病的病因与幕塾泄兀赴泻驼些反应中间产物的能力很大程度上依赖一个顺式作用元件的活化,这个顺式作用元件被命名为抗氧化反应元件珹K嬖谟诳寡趸鞍和解毒酶基因的饲颉T谌死唷⒋笫蟆⑿∈蟮亩嘀肿橹中及原代培养的星形胶质细胞、神经元中都已证实,动的靶基因包括、琋虶等。碱性亮氨酸拉链畃,鞍准易宓淖B家蜃被激活后,向核内转位,与茸B家蜃有纬稍踊厶褰岷系紸元件,参与下游相酶基因的调控,启动下游抗氧化酶的表达。可被多种物质活化,、甌,畆
相酶的表达,提高细胞抗氧化能力。本研究基于神经变性疾病中氧化应激的病理改变,给予原代培养的星形胶质细胞强氧化剂处理引起氧化损伤,建立氧化应激模型。基于此模型,研究内源性抗氧化酶诱导剂的神经保护作用。本课题应用姜黄素,观察其在该模型中对星形胶质细胞抗氧化能力的影响及对氧化损伤的保护作用,并进一步探讨保护作用机制。论文共分三部分:第一部分探讨星形胶质细胞氧化损伤模型的建立;第二部分证实姜黄素对诱导的星形胶质细胞氧化损伤存在保护作用,并且这种保护作用与相抗氧化酶的上调有关;第三部分进一步探讨姜黄素在星形胶质细胞中所致相解毒酶上调的机制及对星形胶质细胞氧化应激易损性的影响。第一部分原代培养星形胶质细胞氧化应激模型的建立目的:基于星形胶质细胞氧化应激在神经变性疾病中的作用,建立原代培养星形胶质细胞氧化应激模型。为进一步对氧化应激进行深入研究以及抗氧化药物的筛选奠定了基础。方法:取出生后天双等位基因存在/小鼠脊髓,应用胰酶消化法进行原代星形胶质细胞培养、鉴定及纯化。纯化后的第代细胞培养旌螅谂嘌褐屑入/作用分钟后去除,加入新培养液。用抗胶质细胞酸性纤维抗体进行免疫组化染色,激光共聚焦显微镜进行观察;四甲基噻唑蓝ń邢赴活力分析;检测细胞培养液中乳酸脱氢酶及丙二醛中文摘要琇
结论::培养第切谓褐氏赴鸊粜韵赴%以上;培养第代星形胶质细胞阳性细胞数达%以上。干预组星形胶质细胞与对照组相比细胞活力下降、胞液中蚆含量升高,稍龆唷结论:本研究成功地进行了原代星形胶质细胞体外培养、纯化及鉴定。使用引起星形胶质细胞氧化损伤,造成氧化应激模型。第二部分姜黄素对诱导的星形胶质细胞氧化损伤影响以及与相抗氧化酶关系目的:观察姜黄素对诱导的星形胶质细胞氧化损伤的影响及对相酶的作用。方法:给予原代培养星形胶质细胞预孵育、/;扑∈焙螅穞疞作用分钟。ń邢赴盍Ψ治觯患觳庀赴嘌褐蠱含量;.探针检测细胞内桑惶崛∽橹冉蛋白,用免疫印迹检测相酶的蛋白水平;激光共聚焦显微镜免疫染色法观察泶锴榭觯攵哉兆樽霰较。结果:疞姜黄素可以上调、表达,且/;扑厣系鞒潭茸罡摺O赴盍升高,较陆担琑生成减少。、畉疞姜黄素未见明显改变且使细胞