文档介绍：广东药学院
硕士学位论文
五没食子酰基葡萄糖抑制卵巢癌细胞增殖及其机制的研究
姓名:石大禹
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:朱家勇
2011-05-13
广东药学院硕士研究生学位论文
五没食子酰基葡萄糖抑制卵巢癌细胞增殖
及其机制的研究

硕士研究生:石大禹
专业:病原生物学
导师:朱家勇教授
中文摘要
五没食子酰基葡萄糖(pentagalloylglucose ,PGG)是一种天然多酚化合物,
自然界中分布及其广泛。之前的研究表明PGG具有多种生物活性,具有治疗和预
防一些重要疾病如炎症、肿瘤以及糖尿病的潜能,对宿主没有毒副作用。卵巢癌
是主要的妇科肿瘤之一,目前没有有效的治疗药物。本课题选取不同的卵巢癌细
胞株作为实验对象,研究五没食子酰基葡萄糖对卵巢癌细胞增殖的影响,并初步
探讨可能的分子机制。
实验方法:
1. 使用 MTT 实验研究 PGG 在体外对卵巢癌 HO-8910、HO-8910PM 与 SKOV-3
细胞增殖的影响,使用普通光学倒置显微镜观察 PGG 处理后细胞形态改变。
2. 使用 PI 单染流式细胞检测分析 PGG 对卵巢癌细胞细胞周期分布影响;使用
Hoechst 染色 PGG 处理之后的细胞,在荧光显微镜下观察细胞核形态的变化,
看是否出现凋亡特征,然后使用 AnnexinV-FITC/PI 双染流式细胞分析检测
PGG 对卵巢癌细胞凋亡率的影响。
3. Western blot 用于检测细胞内 Caspase 家族成员的剪切情况,出现 Caspase 相
应的剪切小片段证明 PGG 激活了细胞内 Caspase 凋亡信号通路;Western blot
还用于检测 NF-?B转录因子的 P65 亚基与其抑制蛋白 I?B在细胞质与细胞核
中的分布变化,确定 PGG 对 NF-?B信号通路的影响。
4. RT-PCR用来研究PGG对NF-?B的靶基因bcl-2、bcl-xl、ciap-1、ciap-2、survivin、
niap、xiap、cyclinD1 转录影响,这些基因是肿瘤细胞中的促存活基因。
实验结果
1. PGG 能以时间与浓度依赖的方式抑制卵巢癌细胞 HO-8910、HO-8910PM 与
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SKOV-3 体外增殖,当 PGG 剂量大于 20 µM ,或作用时间达到 48 h 时,PGG
对卵巢癌细胞的抑制呈现出明显的时间与剂量依赖关系(P<)。
2. PGG 改变三株卵巢癌细胞的细胞周期分布,诱导卵巢癌 HO-8910 与
HO-8910PM 细胞凋亡。随着 PGG 处理剂量增加与作用时间延长,细胞周期
向 S-期富集。Hoechst 染色显示,PGG 诱导了 HO-8910 细胞的核发生凋亡样
形态改变,对 SKOV-3 细胞膜与细胞核形态没有影响;AnnexinV-FITC 染色
结合流式细胞分析显示 PGG 诱导 HO-8910 与 HO-8910PM 细胞凋亡出现早期
凋亡,但是对 SKOV-3 细胞凋亡影响较小。
3. PGG 处理之后卵巢癌细胞内出现了几个 Caspases 家族成员的活性形式,出现
相应的 c-Caspase-9、3、7;PGG 虽然上调了外源性凋亡途径中上游的肿瘤坏
死因子受体表达,但是抑制了 Caspase-8 的剪切。
4. PGG 处理卵巢癌细胞抑制转录因子 NF-?B的 P65 亚基核转位,伴随着其抑制
性蛋白 I?B在细胞质中积累;相应地,PGG下调了 NF-?B的几个靶基因 bcl-2、
bcl-xl、surviving、niap、xiap、cyclinD1 的 mRNA 表达。但是上调了 ciap-1、
ciap-2 的 mRNA 的表达,对 bax 的 mRNA 表达没有影响。
结论
PGG 能抑制卵巢癌细胞的体外增殖,其机制涉及 PGG 诱导细胞周期 S-期阻
滞与诱导细胞凋亡。PGG 可能通过抑制细胞内致癌转录因子 NF-?B的活性,下
调其凋亡抑制基因的表达,诱导细胞进入内源性 Caspase 凋亡途径,从而导致细
胞死亡。
关键词:五没食子酰基葡萄糖;卵巢癌;细胞周期;细胞凋亡;Caspases;NF-?B
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Research of pentagalloylglucose inhibiting
proliferation of ovarian carcinoma in vitro and the
underling mechanis