文档介绍：硕士学位论文
论文题目 ABCA1 调节大鼠肺泡巨噬细胞
炎症反应过程机制的研究
研究生姓名臧守华
指导教师姓名詹英、陈军、杨建平
专业名称麻醉学
研究方向肺损伤与 ARDS
论文提交日期 2013 年 4 月
ABCA1 调节大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应过程机制的研究中文摘要
ABCA1 调节大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应过程机制的研究
第一部分:针对大鼠肺泡巨噬细胞上 ABCA1 表达的 siRNA 筛选及转染
复合物细胞毒性的检测
目的筛选有效抑制大鼠肺泡巨噬细胞上 ABCA1(ATP-binding cassette transporter
A1 )表达的小干扰 RNA(simall interference RNA,siRNA)序列,并检测转染复合物的
细胞毒性。
方法设计并合成针对 ABCA1 的 siRNA 3 条(siRNA1172 , siRNA5948 ,siRNA6072 )及
1 条与 ABCA1 基因无同源性的带绿色荧光标记的阴性对照 siRNA,在 HiPerFect
Transfection Reagent 介导下转染大鼠肺泡巨噬细胞。用 RT-PCR 方法测定干扰后大鼠
肺泡巨噬细胞上 ABCA1 mRNA 表达,流式细胞术方法测定干扰后 ABCA1 蛋白表达,
比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的 siRNA。采用 MTT 法检测转染复合物
的细胞毒性。
结果① siRNA(50nmol·L -1 )和 HiPerFect Transfection Reagent(6µL)有较高的转
染效率;②与阴性对照组相比,ABCA1 siRNA(50 nmol·L -1 )干扰大鼠肺泡巨噬细
胞 24 h 后 ABCA1 mRNA 的相对表达量降低,分别降低:%(siRNA1172 ),
%(siRNA5948), %(siRNA6072)。③与阴性对照组相比,ABCA1 siRNA(50
nmol·L -1 )干扰大鼠肺泡巨噬细胞 48 h 后 ABCA1 蛋白表达降低,分别降低:
%(siRNA1172 ), %(siRNA5948), %(siRNA6072)。
结论①三条siRNA 均可有效抑制大鼠肺泡巨噬细胞ABCA1的表达。②转染试剂
HiPerFect Transfection Reagent 6µl与终浓度为50 nmol·L -1 siRNA,为合适的转染比
例。
关键词:肺泡巨噬细胞;ATP结合盒转运体A1;小干扰RNA;筛选;转染复合物;
细胞毒性
第二部分:ABCA1 调节大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应过程机制的研究
目的观察脂多糖(LPS)对大鼠肺泡巨噬细胞 ATP 结合盒转运体 A1(ATP-binding
I
中文摘要 ABCA1 调节大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应过程机制的研究
cassette transporter A1,ABCA1)表达的影响,以及 ABCA1 对于大鼠肺泡巨噬细胞表面
Toll 样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)的影响,探索在 LPS 诱发的大鼠肺泡巨噬细
胞炎症反应过程中,ABCA1 的调节机制。
方法分别以不同浓度的 LPS(0,,2,20,200 µg/L)作用于大鼠肺泡巨噬
细胞,24h 后采用 RT-PCR 方法测定大鼠肺泡巨噬细胞 ABCA1 mRNA 表达,流式细
胞术方法测定 ABCA1 蛋白表达。以相同浓度的 LPS(20µg/L)作用于大鼠肺泡巨噬
细胞,于不同的时间点(0,2,6,12,24 h), 采用上述方法分别测定 ABCA1mRNA
和蛋白表达。此外,联合使用 20µg/L LPS 以及特异性抑制 ABCA1 表达的 siRNA 干
扰大鼠肺泡巨噬细胞,12h 后,采用上述方法分别测定 TLR4 mRNA 和蛋白表达。
结果① LPS 呈浓度和时间依赖性抑制 ABCA1 mRNA 及蛋白质的表达
(P<)。②大鼠肺泡巨噬细胞 ABCA1 的表达被特异性 siRNA 抑制后 LPS 引起的
TLR4 上调较正常组更为明显(P<)。
结论在 LPS 诱发的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应过程中,ABCA1 可能通过影
响 TLR4 的表达参与炎症的调节。
关键词:脂多糖,巨噬细胞,肺泡,ATP 结合盒转运体 A1
作者:臧守华
指导教师:詹英
II
ABCA1 induced TLR4 expression mediate acute