文档介绍：河南大学
硕士学位论文
Tim3参与巨噬细胞炎症反应的机制及对巨噬细胞抗原呈递作用
的研究
姓名:耿少霞
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:马远方;韩根成
2011-06
摘要
背景:T 细胞免疫球蛋白及粘蛋白家族-3(Tim3)作为 Tim 家族的成员,有 281 个
氨基酸组成,最先被发现特异的表达在 CD4+ Th1 细胞上,而不在 Th2 细胞上表达。这
个发现促使人们去研究 Tim3 是如何调节 Th1 型细胞反应,又是如何在自身免疫性疾病
中发挥作用? Tim-3 分子通过负性调节 Th1 细胞的功能广泛参与了特异性免疫应答的
调节。近期研究发现,Tim-3 在 DC、单核细胞、巨噬细胞等天然免疫细胞表面也有表
达,通过激活炎症细胞发挥促炎症作用。
目的:探讨 Tim-3 对巨噬细胞功能的调节作用及其机制。
方法:(1)首先将含 Tim-3SiRNA 及 NC 对照序列的载体经脂质体分别转染细胞系
,以 G418 加压筛选,通过 RNA 干扰降低 Tim3 在巨噬细胞表面的表达,构
建了一种稳定低表达 Tim3 的巨噬细胞系。以野生型及低表达 Tim3 的巨噬细
胞为研究对象,探讨 Tim-3 对巨噬细胞活性及表型的影响。(2)体外阻断或激活 Tim3
通路,ELISA 法检测巨噬细胞等天然免疫细胞分泌炎症因子 TNF-α、IL-6 的水平;通过
Western blot 方法检测炎症反应信号通路中关键分子 AKT 、PAKT、NF-kB 的变化;通
过 ELISA 法、Western blot 检测 Tim-3 与模式识别受体 TLR4 的相互作用。双荧光素酶
报告基因系统检测 NF-kB 的活性。通过以上方法检测 Tim3 参与巨噬细胞炎症反应的机
制。(3) 建立败血症动物模型,观察 Tim3 在败血症早期和晚期的不同作用。(4) 以败
血症小鼠模型为基础,Tim-3 体内阻断实验检测 Th1、Th17 细胞活性,研究 Tim-3 对
Th1,Th17 的分化的影响以及对小鼠腹腔巨噬细胞表面共刺激分子 CD80、CD86 的表达
的影响。同时体外实验检测 Tim3 对巨噬细胞表面共刺激分子 CD86/CD80 表达比例的影
响以及对 Th1,Th17 的分化的影响。从体内实验和体外实验两方面探讨 Tim3 对巨噬细胞
抗原呈递作用及对 Th1,Th17 细胞极化的影响。
结果:(1)成功构建了重组载体 Tim3-siRNA,建立了稳定低表达 Tim3 的巨噬细胞
系。(2)为了探讨 Tim-3 在天然免疫中的调节作用,我们观察了 Tim-3 对巨噬细胞活性的
影响,结果显示 Tim-3 刺激巨噬细胞分泌炎症因子 TNF-α、IL-6。同时 ELISA 结果显示
Tim3 通路和 TLR4 通路在刺激巨噬细胞释放炎性因子 TNF-α方面存在相互拮抗效应。
Western blot 结果也显示 Tim3 信号通路和 TLR4 信号通路的相互拮抗关系涉及到对一些
重要的信号分子的影响,如 AKT 活性过强抑制了 NF-kB 活性,从而抑制了 LPS 介导的
I
TNF-α的分泌。(3)体内实验结果显示,以败血症小鼠模型为基础,Tim-3 在败血症早
期表达升高,发挥抗炎作用,而在败血症后期表达失调。(4)体内体外实验结果显示,
Tim-3 在提高 CD86,降低 CD80,提高 CD86/CD80 的比例中发挥重要作用。同时 Tim-3
可以促进 Th1 及 Th17 细胞的分化,表现为 Th1 型细胞因子 IFN-γ,以及 Th17 型细胞因
子 IL-17 表达的升高。
小结:(1)Tim3 通过促使巨噬细胞分泌炎症因子 TNF-α、IL-6 参与了天然免疫反应调
节。(2)Tim3 通路和 TLR4 信号通路在介导炎症反应方面存在相互拮抗效应。(3)Tim3
参与了巨噬细胞表面 CD80,CD86 共刺激分子的调节,Tim-3 通过提高 CD86/CD80 的
比例促进 Th1 及 Th17 细胞的分化。(4)本实验为认识 Tim-3 在天然免疫和获得性免疫
中的作用提供了新的机制,为 Tim3 在巨噬细胞介导的免疫反应中的调节作用提供了新
的理论依据。

关键词:Tim3,巨噬细胞,天然免疫,获得性免疫

II
ABSTRACT
Backgrounds: Tim3, a member of the Tim (T cell immunoglobulin and mucin domain) family , is the