文档介绍：东北农业大学
博士学位论文
大豆蚜对吡虫啉的抗性监测及抗性机理研究
姓名:杨帅
申请学位级别:博士
专业:作物学;作物栽培学与耕作学
指导教师:赵奎军
2012-06-08
摘要世纪年代推行以来,对大豆蚜良好的防治效果使其成为针对这一害虫效果最好、使用最广本文通过田间抗性调查、室内抗性筛选及种群适合度研究、交互抗性研究及抗性现实遗传力研究,系统分析了大豆蚜对吡虫啉产生抗性的风险;利用室内筛选的抗性品系和敏感品系试定量际酰源蠖寡留人狨ッ富騧降谋泶锪拷辛朔治觯〉昧硕嘞罹哂一、大豆蚜对常规杀虫剂的敏感基线构建和田间吡虫啉抗性监测通过杀虫剂毒力测定方法建立了大豆蚜对殖9嫔背婕恋拿舾谢撸⒁源宋;挤和哈尔滨地区田间大豆蚜对殖9嬉┘恋目挂┬宰纯龇直鸾辛思嗖猓峁砻鳎省中除长春种群为低水平抗性外,其他鍪区乩碇秩捍蠖寡量剐晕V械人娇剐裕种药剂中,高效氯氟氰菊酯、吡虫啉和溴氰菊酯分别产生高、中、低等水平的抗性,其他四种药剂未产生抗药性。二、抗吡虫啉大豆蚜品系的选育及抗性风险评估采用浸渍法对室内连续饲养多年的的大豆蚜种群进行代的抗性筛选,。从抗性筛选的速度来看,大豆蚜对吡虫啉的抗性发展速度并不快,与棉蚜、桃蚜的吡虫啉抗性筛选相类似,从抗性筛选的结果来看,连续筛选的前代抗性增长较缓慢,筛选的?焖僭龀て冢罂剐曰疚榷ㄔ蹲笥遥入了一个增长的平台期,总体呈现“毙驮龀で魇啤6允夷谏秆拇蠖寡炼赃脸孢抗性现实遗传力辛瞬舛ǎ⑼撇獬鎏镂嗜硕寡炼赃脸孢目剐蕴岣吨恍~U獗砻鞔蠖寡炼赃脸孢目剐栽龈吆螅中目剐陨秆∪阅苁箍挂┬越徊缴仙三、吡虫啉抗性对大豆蚜种群适合度的影响通过构建种群生命表,观察比较了筛选过程中吡虫啉抗性品系、兔舾衅废档囊系列生长发育和繁殖特征,就抗性对种群适合度的影响进行了研究。用内禀增长力来确定种对适合度的下降幅度明显大于,生长发育和繁殖上也都表现出一系列的不利性。本研究以大豆蚜敏感品系为对照,测定了吡虫啉抗性品系蚑对殖9嫔背婕大豆蚜是大豆的重要害虫之一,吡虫啉自上的当家杀虫剂,为了了解田间大豆蚜对吡虫啉抗性的发生动态,延长吡虫啉的田间使用寿命,虫为材料,分析了抗性产生的生化机制;利用分子生物学技术克隆了大豆蚜烟碱型乙酰胆碱受体基因和羧酸酯酶基因,并对羧酸酯酶基因进行了原核表达及活性分析;同时还利用荧光理论和实际意义的重要成果。别对年和炅侥昙淙ü蠖怪饕7植嫉省区田间大豆蚜对吡虫啉的抗药性动态群的相对适合度,结果表明,抗性品系和硐殖鱿喽允屎隙认陆担襎的相四、大豆蚜抗毗虫啉品系的交互抗性研究的敏感性变化,以了解大豆蚜抗吡虫啉品系对其他药剂的交互抗性。结果表明,随着人豆蚜抗性的不断发展,抗性品系蚑陨铣S玫难碳罾嗌背婕梁途挣ダ嗌背婕辆丫摘要
产生不同程度的交互抗性,但未对有机磷类杀虫剂产生交互抗性。通过室内筛选获得大豆蚜的吡虫啉抗性品系,利用增效试验和解毒酶活力测定,对其抗性机理进行了研究。解毒酶活力测定表明:在抗感品系中,抗性品系的羧酸酯酶比活力明显在抗感品系中对吡虫啉都没有明显的增效作用,而蚉在两个品系中均有增效作用,六、大豆蚜烟碱型乙酰胆碱受体基因的克隆昆虫烟碱型乙酰胆碱受体且赃脸孢4淼男卵碳罾嗌背婕恋淖饔冒斜晡点。本研究利用和技术,从大豆蚜中成功克隆了鲅碳钚鸵阴5ḿ钍芴寤因全序列,其中鑫猀亚基基因,鑫亚基基因,分别命名为:、.和渲蠥腔ǔ,编码霭被幔籄亚基全长,编码霭被幔籄腔ǔ,编码霭被幔籄腔ǔ、和。同时,还获得了囊桓鲅≡裥约艚覣,全长均具有昆虫腔牡湫吞卣鳎肫渌コ鎛亚基的同源性很高,说明克隆的基因确实是大豆蚜的颉6源蠖寡羘亚基进行多态性分析,未发现氨基酸突变。该研究结果为今后进一步研究大豆蚜奶烊谎腔槌杉肮δ埽治龃蠖寡炼孕卵碳类杀虫剂的靶标抗性产生奠定了基础。七、大豆蚜羧酸酯酶基因的克隆与原核表达。通过序列比对和功能性分析,具备羧酸酯酶的结构特征,如蛋白活性中心的催化三联体:,,,证明其属于羧酸酯酶家族。通过构建重组表达载体性吮泶锛测表明,其能够水解小醋酸萘酪,说明表达产物具备羧酸酯酶活性。八、抗感大豆蚜品系羧酸酯酶表达量研究利用实时荧光定量际酰获得了抗、感大豆蚜品系单头蚜虫羧酸酯酶的相对表达量。分析结果得出,抗性品系大豆蚜羧酸酯酶表达量平均比敏感品系大豆蚜羧酸酯酶表达量高出叮结合生化机理分析和原核表达活性分析认为,大豆蚜对吡虫啉的抗药性增加,与其体内羧酸关键词大豆蚜;吡虫啉;抗药性;抗性机理;烟碱型乙酰胆碱受体五、大豆蚜对吡虫啉抗性的生化机制分析高于敏感品系.,而谷胱甘肽蛔R泼赣肟剐孕纬晌薰兀涸鲂匝榻峁砻鳎篋但前者的作用更明显。综合分析认为羧酸酯酶活力增强在大豆蚜对吡虫啉的抗性形成中起重要作用。,编码霭被幔籄哑基全长,编码霭被帷F銰登录号分别为、、、为,编码霭被幔珿登录号为。同源性分析表明,以上