文档介绍：中南大学
博士学位论文
造血干细胞髓系分化中相关基因组蛋白修饰特征的研究
姓名:唐华容
申请学位级别:博士
专业:内科学
指导教师:陈方平
20090501
摘要系特异分化中对相关基因的调控作用,为造血发育、造血干细胞的体研究背景造血干细胞是一种多潜能干细胞,具有自我更新和多向分化潜能。它的多向分化潜能限定于造血系统的全体细胞包括红系细胞、粒系细胞、巨核系细胞、以及淋巴细胞等。伴随造血干细胞系特异分化的是多向分化潜能的丢失和系相关基因的活化与非相关基因的沉默。其具体的调控机制如何,目前尚不清楚。表观遗传学是研究不改变蛄卸捎谄渫獠啃奘我鸬幕开放与否的学科,涉及的主要机制有谆⒆榈鞍仔奘巍⒒因印记、扇诺取F渲醒芯康米疃嗍荄甲基化和组蛋白乙酰化、组蛋白甲基化,这些修饰与活化或失活染色质的结构形成相关。目前研究显示表观遗传修饰在胚胎干细胞的多潜能性的维持和向各系分化的过程中发挥了重要作用,并提出了共价修饰的模型。而表观遗传修饰在造血干细胞的多潜能性的维持和系特异分化中对相关基因的调控作用尚不明确。因此本课题通过从与染色质状态形成密切相关的组蛋白修饰这个角度去观察造血相关基因在富集造血干细胞的赴拖堤匾旆只笙胞中的特征来探讨了染色质构象在造血干细胞多潜能特性的维持和外扩增与移植和白血病发病机制的研究提供新的思路。本研究分为以下三部分。博士学位论文中文摘要
第一部分脐带血来源的赴奶逋獯炕和向各系的诱导分化方法:①,。③流式细胞术检目的:建立一个可行的从脐带血中分选出赴姆法,并在体外摸索出有效的粒系、红系和巨核系的分化体系,为后续实验提供可靠的细胞标本。苑盅〕鯟细胞,再通过二次负性分选选出南赴⒂昧魇较赴跫觳馄浯慷群陀锰ㄅ卫毒苋痉ḿ测细胞活率。②⒑煜狄约熬藓讼捣只用细胞计数法绘制其各系细胞的增殖曲线及用流式细胞术检测诱导分化的效率。结果:①用抗磁珠第一次分选赴螅珻细胞的纯度可达..%:第二次分选后,∏昂笙赴盍ξ>纱ヒ陨稀"谔逋庥盏挤化天时,粒系细胞数增加了:倍,红系细胞数增加了测的结果表明,在诱导分化的第天,赴谋嚷饰ィ赴谋嚷饰ィ珻赴谋嚷饰ァ结论:我们建立了有效的分选方法和体外诱导方法,这为我们后续的实验提供了可靠的细胞标本来源。分化关键词:赴幌赴盅。幻庖叽胖榉盅》ǎ挥盏博士学位论文中文摘要
第二部分微小染色质免疫共沉淀方法的建立因的不同位点的组蛋白囊阴;浇醒芯浚な敌陆细胞中进行的实验方法称。并在诱导前后的关键词:染色质免疫共沉淀方法;微小染色质免疫共沉淀方法;目的:染色质免疫共沉淀悄壳把芯康鞍字视隓相互作用的强有力的技术之一。然而目前的实验方法最大缺陷要求大量的细胞数,而我们分选的细胞很难达到这个要求。因此我们的目的是建立一种能在少量细胞中进行的实验方法,称为微小染色质免疫共沉淀。方法:综合国外相关文献,在传统方法的基础上建立实验方法。并通过运用传统的实验方法和在此基础建立的实验方法对诱导前后的赴斜泶锏膒珠蛋白基的实验法方法的可靠性和特异性。榈鞍谆虻牟煌坏包括高敏位点、蚱舳忧虴蚱舳忧结果:在未处理的赴校胢笛榉椒ü鄄斓基因启动子区域存在一定的水平,而基因的启动子区域则检测到极低水平的水平。,也与以前别的研究者用传统实验方法得出的结果相吻合。结论:在传统实验方法的基础上建立了一种可以在少量的胞中对此方法进行了验证,证实了方法的可行性和可靠性。赴蛔榈鞍乙酰化;榈鞍谆博士学位论文中文摘要
第三部分造血干细胞髓系分化过程中相关基因的组蛋白修饰特征方法:①采用姆椒ḿ觳饬嗽煅7只喙刈B家蜃雍结果:①在O赴懈飨捣只喙刈B家蜃雍突虼目的:观察造血分化相关的转录因子和基因在O赴中以及分化后细胞中的组蛋白修饰特征,探讨染色质构象在造血干细胞多潜能性特性维持和系特异分化中的可能作用。基因在不同类型细胞中的表达水平。不同类型细胞包括赴陀盏挤只蟮腃细胞、赴细胞。造血分化相关转录因子和基因包括早期造血相关转录因子涣O捣只喙刈B家蜃覲,粒系特异基因红系巨核系分化相关转录因子.⒑煜堤匾旎駿途藓系特异基因涣芟捣只喙刈B家蜃覩、,淋系特异基因。②。这植煌淖榈鞍仔奘畏直鹞;罨宰榈鞍修饰包括组蛋白囊阴;⒆榈鞍的乙酰化、组蛋白位赖氨酸的二甲基化⒆榈鞍第焕氨酸的三甲基化鸵种菩宰榈鞍仔奘伟ㄗ榈鞍第位赖氨酸的三甲基化⒆榈鞍第位赖氨酸的三甲基化。在低水平的表达或不表达,而与早期造血相关的转录因子允靖弑泶铩5盋。细胞向粒系特异分化后,粒系相关基因