文档介绍：安徽农业大学
硕士学位论文
玉米WRKY转录因子基因的克隆及耐逆性研究
姓名:刘雪
申请学位级别:硕士
专业:遗传学
指导教师:程备久
2011-06
摘要 
WRKY  转录因子主要存在于植物中,其家族成员广泛参与植物生长发育、代谢
以及对生物和非生物胁迫的反应。本研究利用逆境因子  ZmWRKY33,ZmWRKY57  和 
ZmWRKY62 基因进行胁迫诱导,在此基础上从玉米中克隆这三个 WRKY 基因,并对其
耐逆性功能进行了初步的研究。结果如下:
、高盐和低温对 ZmWRKY33,ZmWRKY57 和 ZmWRKY62 三
个基因进行诱导表达分析,结果显示三个基因均受逆境因子干旱、高盐和低温的诱导
表达。
 WRKY 基因,ZmWRKY33,ZmWRKY57 和 ZmWRKY62。它们
分别编码 307 个氨基酸残基、311 个氨基酸残基和 306 个氨基酸残基,都有 1 个高度
保守的 WRKY 结构域,锌指结构域都为典型的 C2H2。
(p­ZmWRKY33),利用农杆菌介导的方法转化晚晴粳稻愈
伤,获得 20 株 T0 代过表达株系。T 1 代过表达株系的耐逆性功能研究表明,ZmW  RKY33 
具有增强水稻耐干旱、高盐和低温的耐受性。
PRTL2­ZmWRKY33­mGFP,PRTL2­ZmWRKY57­mGF 
­P 和 PRTL2­ZmWRKY62­mGFP,采用基因枪法轰击洋葱表皮细胞进行亚细胞定位分
析,结果显示 ZmWRKY33,ZmWRKY57 和 ZmWRKY62 与 GFP 载体的融合蛋白都定
位于细胞核中,说明 ZmWRKY33,ZmWRKY57 和 ZmWRKY62 蛋白都具有转录因子
的核定位信号特征。
(p­ZmWRKY57(bar +)  和 p­ZmWRKY62(bar +)  )和双链 RNAi 
载体(p1301  (2ZmWRKY57i­bar +)  和 p1301  (2ZmWRKY62i­bar +)  ,转化农杆菌,可用于
下一步玉米转化。
关键词:玉米,WRKY 基因, 遗传转化,耐逆性
I
Abstract 
WRKY transfactors are involved in responses to biotic and abiotic stresses, and  in 
regulation diverse developmental processes. Three WRKY genes, designated ZmWRKY33, 
ZmWRKY57  and  ZmWRKY62,  were responsive to  stress  tolerance  and  isolated  in  maize. 
Their  functions  in  plants  were  explored  preliminarily  in  this  study.  The  results  are 
summarized as follows: 
1. ZmWRKY33,ZmWRKY57and ZmWRKY62 were all responsive to drought、hight salt 
and cold stresses. 
2. Three WRKY genes, ZmWRKY33, ZmWRKY57 and ZmWRKY62, were isolated. 
ZmWRKY33, ZmWRKY57 and ZmWRKY62 dispartly encode 307, 311 and 306 amino acid 
residues, all containing only one conserved WRKY domain with a zinc finger motif of 
C2H2. 
3. An overexpression vector for ZmWRKY33 was constructed and transformed into 
rice calli by Agrobacterium­mediated method. 20 lines of ZmWRKY33­overexpressing T0 
plants were generated. In the next T1  generation of ZmWRKY33­overexpressing plants, the 
study o