文档介绍：南方医科大学
博士学位论文
ATP敏感性钾通道对胶质瘤细胞增殖调控机制的研究
姓名:黄潋滟
申请学位级别:博士
专业:劳动卫生与环境卫生学
指导教师:邹飞
20090524
舾行约赝ǖ蓝越褐柿鱿赴鲋车骺机制的研究博士研究生:黄潋滟指导老师:邹飞教授摘要背景神经胶质瘤是颅内常见恶性肿瘤,国际流行病学统计资料显示,脑胶质瘤的发病率居各种肿瘤的第唬凰劳雎示拥位。具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低的特点,其预后极差。提高脑胶质瘤的综合治疗效果是国内外医学界长期以来努力探索的课题之一,迄今为止现代医学尚未找到令人十分满意的根治方法。因此,研究神经胶质瘤的发生发展机制,寻求新的治疗靶点已成为亟待解决的问题。离子通道的活动是细胞增殖存活的基础之一,其参与电信号的传导、肌肉收缩、激素分泌、免疫调节、细胞周期和代谢等生物活动过程,并与诸多病理过程密切相关。离子通道与恶性肿瘤的相关性研究正日益受到重视。大量的离子通道存在于各个类型的肿瘤细胞中,某些特定离子通道可调控肿瘤细胞的膜电压和信号,调节胞质内离子浓度、和细胞体积,参与信号转导途径之间相互作用,调控肿瘤细胞的增殖和/或凋亡,是维持肿瘤细胞内环境稳定的重要因离子通道尤其是钾离子通道在恶性肿瘤的增殖及细胞周期的调节中发挥关键作用。然而,钾通道在此过程中的确切角色和具体的作用机制尚不明确。敏感性钾通道ǖ是一种重要的钾离子通道,其广泛分布于全身各个组织器官,如脑垂体、心肌、平滑肌、骨骼肌和胰腺的细胞,参与了多种细胞功能的调控,同时也涉及神经元再生、死亡及细胞周期调控等过程。近年来,博士学位论文素。
通道在恶性肿瘤中的作用逐渐引起人们的关注。研究发现,通道在某些恶性肿瘤中呈高表达,可影响抗脑肿瘤药物的血脑屏障通过率,并参与膀胱癌细胞的增殖调控。尽管通道在肿瘤调控中的具体作用机制及信号转导通路尚不明确,但通道以其在体内广泛性分布、在多种恶性肿瘤组织中高频率表达、可调控肿瘤细胞周期进展与细胞增殖的特点,已经成为无论是从基因水平还是蛋白水平的、极具价值的恶性肿瘤诊治新靶点。胶质瘤细胞的增殖受多条信号转导通路的调节,疢藕磐肥瞧渲凶钗V匾5男藕磐分弧作为通路中介导细胞存活和增殖的重要分子,在肿瘤增殖过程中起到重要作用。因此,在研究通道调控胶质瘤细胞增殖过程的分子机制时,我们首选本研究聚焦于通道对胶质瘤细胞增殖调控的作用机制,分析通道的功能改变与胶质瘤细胞增殖的关系,并探讨其调控胶质瘤细胞增殖的分子机制,为阐明通道对肿瘤细胞的增殖调控机制提供新的理论基础,并为胶质瘤的治疗提供新的靶标。对开展以离子通道为靶点治疗神经胶质瘤提供重要的目的以舾行约赝ǖ通道越褐柿鱿赴鲋车牡骺刈饔梦G腥点,从通道的电生理学和分子生物学特性两方面入手,采用、免疫细胞化学、免疫印记、流式细胞术、激光共聚焦等技术,通过体内外实验,分析通道的功能改变与胶质瘤细胞增殖的关系,并探讨其调控胶质瘤细胞增殖的分子机制,为阐明神经胶质瘤细胞增殖机制提供新的线索,为神经胶质瘤临床治疗提供新的治疗靶点。方法将胶质瘤细胞株險糜培养箱内培养%タ气直鹩肒通道的激动剂二氮嗪琄棚,通道的阻断剂甲糖宁或处理细胞;或的阻断齐预处理分钟后,再分别给予中文摘要贰理论依据。
记方法检测┩ǖ兰癊激酶在不同处理组中表达水平的差异。.%球。同时在在体成瘤实验中也得到相通道的阻断剂甲糖宁及笸ǖ赖募ざ炼`海换虿捎梅肿由镅У姆椒ㄔ诮质瘤细胞中过表达或干扰通道。运用免疫细胞化学的方法观察通道在细胞中的表达情况,运用ḿ傲魇较赴醣冉舷赴脑鲋城榭觯辉擞妹庖哂技术观察通道的活性改变对胶质瘤细胞在体内增殖情况的影响。运用激光共聚焦技术观察通道的活性改变对细胞膜电位及胞内钙浓度的影响。结果数据表明,与正常的星形胶质细胞相比,⑾郑琄棚,通道的活性改变可影响胶质瘤增殖:..%,.;使用技术降低通道表达或抑制ǖ阑钚跃梢种平褐柿鱿赴脑鲋扇抛橄嘟嫌对照组,细胞的数目减少了.%.%;第六天險瓒霞磷樵殖率分别为ィ..%;对照组增殖率分别为同的结果细胞的成瘤实验中,阻断剂组、激动剂组及对照组的肿瘤重量分别为..,.辉赨赴某闪鍪笛橹校瓒霞磷椤激动剂组及对照组的肿瘤重量分别为..,..A魇较赴踅峁允荆琄ǖ雷瓒霞量山ń褐柿鱿赴南赴芷谧滞在/期进而抑制胶质瘤细胞的增殖细胞的流式细胞术结果显示:阻断剂组、激动剂组及对照组/..%,.ィ籗期的百分比为.%,.ィ.%:细胞的流式细胞术结果显示:阻断剂组、激动剂组及对照组/.%,.ィ籗期的百分比为.%,.ィ.。上述结