文档介绍：天津医科大学
硕士学位论文
TNF--α诱导B16细胞自体吞噬作用机制的研究
姓名:鄢文慧
申请学位级别:硕士
专业:生物医学工程
指导教师:乔海晅
2012-05
中文摘要目的在前期研究中发现,肿瘤坏死因子.。【一可以诱导小鼠黑色素瘤细胞凋亡,但是其是否能够诱导赴⑸蕴逋淌赡壳吧胁幻魅贰R虼耍在前期研究的基础上,通过相差显微镜观察细胞活性、透射电子显微镜观察细胞内是否存在自体吞噬泡及其数量的变化,分析【是否能够诱导细胞发生自体吞噬;进一步检测自噬相关基因和蛋白的表达变化,分析参与猚盏嫉腂赴蕴逋淌傻墓丶蜃樱徊⑼ü觳庾允尚藕磐飞系标志性基因和蛋白的表达,分析【诱导赴允傻男藕磐罚约各通路对自噬的调控作用。方法逋馀嘌∈蠛谏亓鯞细胞,根据处理方法不同分为对照组、【处理组痬、、。收取细胞,提取细胞总酆厦噶词椒从检测自噬相关基因、、澳谥释す丶駽的表达变化。收取细胞,裂解液裂解细胞,提取细胞总蛋白,蛋白免疫印迹椒ḿ觳獍资杀曛拘缘鞍孜⒐芟喙氐鞍轻链、自噬性死亡标志性蛋白⒉溉槎锢着撩顾匕械鞍芳傲姿峒〈激酶/蛋白激酶殖艫饭丶鞍缀颂翘錝鞍激酶及姿峄降谋浠结果】.与对照组相比,唤龃砗蟮腂赴鱿置飨缘纳ひ种葡窒螅杉部分细胞死亡,【处理笙赴劳隽吭ィ后死亡量达%,具有明显的时效关系。天津医科大学硕士学位论文
关键词:【,可见许多不同阶段的自体吞噬泡。。甅【处理组,,蟃一敬碜升高。自噬相关基因、、在虎虼、蟊泶水平均显著升高;内质网应激关键基因表达显著上调,呈时问依赖性。攵哉兆橄啾龋琓一处理组中磷酸化水平显著下降,呈时问依赖性;姿峄较灾档停较摺一一处理组中,【处理组降低;。,还可以诱导赴⑸,白噬体的数量不再增加,自噬体的降解逐渐增多,从而导致自噬体数量下降。甌一究梢杂盏糂细胞白噬性死亡。甌一通过通路和/酚盏糂细胞自噬。。有研究发现,内质网应激可以导致细胞自噬。【是否可以通过内质网应激导致细胞自噬有待进一步研究。赴白体吞噬通路/内质网应激天津医科大学硕士学位论文
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缩略语/符号说明缩略语英文全称中文全称患谆汆堰过硫酸铵自体吞噬相关基因牛血清白蛋白疎同源蛋白焦碳酸二乙酯二甲基亚砜溴化乙锭化学发光乙二胺四乙酸内质网应激甘油醛一涣姿嵬亚饷小时辣根过氧化物酶微管相关蛋白崃哺乳动物雷帕霉素靶蛋白核糖体蛋白激酶磷酸盐缓冲液聚合酶链式反应磷酸肌醇っ聚偏二氟乙烯每分钟转数十二烷基硫酸钠四甲基乙二胺肿瘤坏死因子三羟甲基氨基甲烷未折叠蛋白反应天津医科大学硕士学位论文籑叩疎··猘琋,琋·
研究现状、成果美创碜允苫蚣捌湎喽杂Φ牡鞍拙窃谧允傻姆⑸刖舌,是一种具有多种生物学环境诱因缂⒍觥⒏呶隆⒌脱酢⒓に卮碳或细胞内压力芩鹣赴鳌⒈湟肿瘤坏死因子活性的细胞因子,它通过与细胞膜上的肿瘤坏死因子受体,岷弦鹣赴谝涣藕糯ǖ迹钪盏贾麓蠖嗍琢鱿赴某些非肿瘤细胞死亡。内源性的饕@丛从诹馨拖赴狢【偷ズ巨噬细胞.。猚【能够直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无明显毒性作用,是迄今为止发现的直接杀伤肿瘤细胞作用最强的生物活性因子之一,其诱导肿瘤细胞凋亡的作用受到极大关注川。自体吞噬峭淌砂ㄏ赴髟谀诘陌首榉植⑹蛊浒囊泡的过程,是广泛存在于真核细胞内的一种溶酶体依赖性的降解途径,通过“分隔膜”包裹细胞质和细胞器等物质形成自噬体通过微管系统与溶酶体结合成自噬溶酶体⒔到獍的物质。自体吞噬允主要分为三种类型:巨自噬,微自噬和分子伴侣介导的自噬—ǔK档淖允杉淳拮允蓔到目前为止,自噬的研究主要集中在酵母及其它重要的单细胞真核生物中,对植物和哺乳动物的自体吞噬过程了解很少。生物学家们从世纪年代开始利用酵母为模型来研究自噬,到目前为止已经发现了二十余个与自噬有关的基因,其中将近一半的基因在果蝇、线虫、哺乳动物等多细胞物种中都十分保守NA送骋槐曜迹闗庑┗蛲骋弧っ狝起着重要作用。目前,通常将自噬的发生分为四个阶段【浚孩僮允傻挠盏肌D承蛋白质聚集和微生物侵蚀峒せ钕赴鸄体吞噬的信号通道。一旦细胞接收到适当的信号,细胞自体吞噬的抑制剂就会被抑制,而执行蛋白质则会被激活,从而激发一系列反应。细胞质中的线粒体等细胞器首先被称为“分隔膜