文档介绍：实验八:不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳实验八:不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳贾跃腾罗世翔一、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳实验操作及注意事项(P138)实验分组(每人做一管,每组配一份胶)  认清试剂(试剂和吸管对号、量器的使用) 封管 分离胶配制与灌胶(浓度为6%,化学聚合,A1C2H2G5,每组总体积为10ml,灌胶高度为7-8cm) 封正丁醇3mm(手法、高度、15min左右出现折光线时可进行下一步操作):1、封管要严,防止漏液。2、固定玻璃管要竖直,防止夹碎。3、每组配一份胶,试剂与移液管对号,准确加量。4、配胶后立即灌胶(用滴管灌胶,用后立即清洗)5、正丁醇沿管壁缓缓加入浓缩胶配制(浓度为3%,光聚合,B1D2E1F4,每组总体积为8ml) 倒掉正丁醇灌浓缩胶(,上面留1cm空隙加样) 封正丁醇3mm(观察界面,10分钟左右出现折光线时可倒去正丁醇):1、倒掉正丁醇,用滤纸吸干再灌浓缩胶。2、配胶后立即灌胶(用滴管)3、灌胶后立即清洗滴管,防止胶凝固于管中。4、撕掉封口膜,用胶塞将玻璃管固定于电泳槽上(竖直,防漏)5、加电极缓冲液(注意液面)安装电泳槽(结构、原理、电流及电极的方向、不漏水、除气泡) 加buffer(没过上下管口)  样品处理并加样(20ul)  电泳(6mA/管,距底1cm时停止) 剥胶 固定(时间5min) 染色(时间2min) 、加样、电泳二、电泳基本原理及相关知识