文档介绍：组织化学技术概述
(组织胚胎学教研室)
主讲:张端莲

组织化学(histochemistry)技术是通过化学或物理反应原理显示组织切片或细胞内某种化学成分,进行定位、定量及其与功能相关的研究。
随着科学技术的不断发展,组织化学在近几十年来已经得到了迅速的发展,产生了许多分支,如核酸与蛋白质、蛋白质与氨基酸、脂类与蛋白质、碳水化合物与粘蛋白及粘多糖、无机物组织化学、酶组织化学、电镜组织化学、荧光组织化学、免疫组织化学、同工酶组织化学、定量组织化学、原位杂交组织化学和放射自显影技术等。因此,现代组织化学的概念已经大大的超过了以往的范畴,无论从理论、内容、研究手段、研究范围都比以往更广泛及更深入。

应用组织化学技术(histochemical technics),显示组织细胞内的各种化学物质和代谢状态。光镜组织化学技术(microscopic histochemical technics)所显示的组织化学物质,是呈色反应(staining rection),呈色反应的强或弱,是表示组织细胞内化学物质含量的多少。酶组织化学(enzyme histochemical ),所显示酶的呈色反应的强或弱,也称酶活性反应(enzyme active rection)。光学显微镜下所见的组织化学呈色反应也称阳性反应(positive rection)。
电子显微镜组织化学技术(electron microscopic histochemical technics),是在电镜观察时,所显示的化学物质,呈现出的电子密度(ectron dendity)高或低即表明所含量的程度,或酶的活性强、弱。光镜和电镜组织化学,均可对所显示的化学物质和酶类,在组织细胞内,进行定性、定量和定位观察。

酶类、糖类、脂肪、核酸、蛋白质等
酶(Enzyme)
酶(Enzyme)是具有催化功能的一种特殊蛋白质,有些
酶是单纯蛋白质,仅由氨基酸组成,如一些水解酶;另一
些酶是结合蛋白质,它们在分子组成中,除氨基酸外,还
含有金属离子或其它小分子的有机化合物作为酶的辅基。
酶是生物细胞内合成的具有专一性的生物催化剂,人体的各
种机能活动都与酶的活性有密切关系,生物体内的一切新陈
代谢活动都是在酶的催化作用下进行的。因此,酶在机体内
的各种反应和鉴定手段涉及到各种基础学科,如组织、生理
、生化和病理等已成为日益为人们所重视的内容之一。
(一)酶的分类
1. 水解酶即催化水解反应的酶,它们是藉水的有或无以催化水解底物的反应。如磷酸酶、酯酶、肽酶等。
2. 氧化还原酶是催化氧化-还原反应的酶类。包括脱氢酶、氧化酶、过氧化物酶和单氧酶。其中脱氢酶催化底物脱氢,如琥珀酸脱氢酶;氧化酶是直接或间接藉氧催化接受电子的酶,如细胞色素氧化酶。
3. 转化酶催化功能基团部分分子转移形成另一新化合物的酶。
,藉两个其它分子共同结合催化形成新分子。
5. 裂解酶促进一种化合物分成两种化合物,或由两种化合物合成一种化合物的酶类,可以从其底物除去基团并遗留双键。
6. 异构酶催化同分异构体的相互转化。
(二)酶的组织化学反应法
1. 偶氮染料法酶的活性使一部分萘酚释放,以同时(“同时偶联”)或稍后(“后孵育偶联”)与某重氮盐结合。重氮盐是原发性芳香族胺与亚硝酸的反应产物经重氮化作用过程所形成。重氮盐与某芳香化合物(如萘酚)形成的反应产物成为不溶性偶氮染料,其显示处即标志出酶的活性所在。
2. 吲哚酚法酶活性促使吲哚酚底质释放吲哚基并很快被氧化为不溶性靛蓝最终产物。
3. 金属---金属盐法是指金、银、铜、铁、铝、钴等金属。金属、金属盐及其化合物都具有颜色,容易发生呈色反应。酶的分解产物和金属一般都可以结合。因此,酶的活性可使孵育底物分解,其生成的基团与金属离子结合而沉淀,最后使酶的活性所在处形成不溶性的有色盐。
-还原反应法在氧化还原反应后,氢被从某物质移除(氧化作用),转移到另一物质(还原作用)。如氧化酶的显示是酶的活性催化底物将氢转移到四唑盐,使之还原成为非水溶性甲色素于该酶活性所在处。
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酶类
 
酸性磷酸酶 Holt与Bitensky改良磷酸铅法
Gomori与McDonedel硫化铅法
碱性磷酸酶 Gomori-Takamatsu法
Gomori改良钙钴法
Gomori萘酚磷酸酯法
琥珀酸脱氢酶 Nachlas硝基蓝四唑法
Pearson二甲亚砜法
过氧化物酶 Graham-Karnovsky法
Vitale辣根过氧化物酶