文档介绍：菌联兔蜜吸魔测定法
酶联免疫吸附测定法
概述
抗原合成
抗体制备
ELISA检测方法建立
第一节枫述
免疫检测技术发展历程
中国
国际(欧美为主)
兴起于20世纪70年代,,现已基本退
用于县级以上E
出临床应用:
放射兔疫法
产品处于衰退期:
品生命周期已终结
厂商试剂与仪器共同开发,,试剂基本
系列化
系列化。
兴起于20世纪80年代,,现仍在临床
于各级临床机构,为我国临床免疫诊断应用:
酶联免疫法
的基本方法
产品处于衰退期:
产品处于成熟期
厂商试剂与仪器共同开发,试剂基本
CELISA)
厂商试剂与仪器共同开发,试剂尚未系列化
系列化。
导入于20世纪90年代,,现已被临床
医院开展个别项目
普遍使用,成为临床免疫诊断的支柱方
:
(C LIA
无厂商开发生产,完全依赖进口。
品处于成熟期
厂商试剂与仪器共同开发,仪器自动
化程度高,试剂系列化状态好
第一节概述」
免疫分析是建立在标记抗原(λg和非标记抗原(Ag与限量的特异抗体(Ab)
的竞争结合反应,这种竞争作用构成了免疫分析的理论基础。
在这种测定方法中有3种必要的试剂
①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂)
②酶标记的抗原或抗体(标记物)
③酶作用的底物(显色剂)
:
灵敏度高
通常生化分析的最小检出值可达到10-3-10-***平,而免疫分析最小检
出值可达到10-9-10-12***平,近年来检测方法的灵敏度向着10-15g发展,
比一般生化分析提高1000-100000
特异性:
由于抗原抗体反应的高度特异性,免疫分析具有很强的特异性。一种物
质(如激素)的免疫分析能辨别区分结构非常相似的物质。
操作简便:
主要是免除了烦琐的样品前处理,适用于大量样品筛选、分析。
仪器简单
应用广泛
:
抗原合成与鉴定
抗体制备
ELSA方法建立
半抗原修饰
动物免疫
基本原理
半抗原与载体偶联
多克隆抗体制备
分类
人工抗原鉴定
单克隆抗体制备
操作流程
第二节抗原合成
(1)抗原:能够剌激机体产生免疫反应的,一切具有抗原性的物质。
(2)抗原决定簇:指位于抗原分子表面或其它部位的具有一定组成和结构的
特殊化学基团,它能与免疫系统中的淋巴细胞上的受体及相应的抗体分子结
合。多数天然抗原具有多个抗原决定族,不冋的抗原其抗原决定族不同,也
有共冋抗原决定族的现象一交叉反应的原因。
(1)免疫原性:能够诱导机体产生抗体或形成免疫回答反应的特性
②2)反应原性:能够与其诱导产生的抗体或致敏淋巴细胞发生反应的特性。
3)特异性:由特异的抗原决定族决定,一种抗原只能诱发一种特异的免疫
应答,产生特异的抗体或致敏淋巴细胞,且只能与与其诱导产生的
抗体或致敏淋巴细胞发生反应
1)异物性:即不是机体正常组织成分
2)化学性:分子量大,分子有一定的特殊化学结构。
3)完整性:完整地进入免疫活性细胞所在的场所。
24抗原的基本类型
)天然(半)抗原:天然的生物、细胞及天然产物-颗粒抗原和可溶性抗原
2)人工抗原:人工化学改造后的抗原
3)合成抗原:经过化学合成的具有抗原性质的分子,主要是氨基酸的聚合
物
颗粒抗原:包括人、动植物、微生物和寄生虫的细胞或细胞的组成结构
物(壁、膜、鞭毛)。
收集含有目标抗原细胞的
制备过程:组织,或通过细胞培养等
离心或过滤收集细胞或
方法扩增细胞的数量
者细胞的组成结构物
可溶性抗原:蛋白质、多糖、细茵***等,可存在细胞内,或胞外
胞外:收集胞外分泌液或细胞培养液,然后进行分离、提取和纯化
胞内:细胞破碎、释放抗原,然后进行分离、提取和纯化。
研磨
机械破碎
超声
细胞破碎
千燥
非机械破碎
酶溶法
纯化与浓缩
化学渗透
硫酸铵盐祈
粗純
聚乙二醇
有机溶剂沉淀法
精制
离子交换色谱
凝胶色谱
亲和色谱
吸附色谱