文档介绍：内蒙古农业大学
硕士学位论文
两株H5N1亚型流感病毒Sw/FJ/1/01和DK/ZJ/52/00的致病性研究
姓名:郭威
申请学位级别:硕士
专业:临床兽医学
指导教师:莫内;陈化兰
20090601
摘要本试验对两株流感病毒//隓痁辛搜究。能感染小鼠并致小鼠死亡,不能感染小鼠。测序发现它们有个氨基酸不同。为了研究与的跨种传播机制,本实验建立了和的反向遗传操作系统。分别以两病毒为背景,用反向遗传技术,在细胞上救获了个单基因替换重组病毒。将救获的个病毒以翮剂量滴鼻感染小鼠。用的和蛱婊籉喽杂Φ幕颍峁沟肦在小鼠肺脏感染能力降低了屯倍。反之若用的和蚶刺婊粃喽杂Φ幕颍峁得由不感染小鼠肺脏变为感染。其它单基因替换的重组病毒对小鼠感染能力没有变化。结果证明蚝蚉蛴跋觳《綟雤谛∈蠓卧嘀械母粗啤为了明确和蚴欠裢庇跋炝瞬《綟蛕孕∈笾虏×Γ颐前蚉蛲碧婊唬峁⑾郑詚腜蚝蚆基因一起替换的基因和颍峁沟貌《綬/在小鼠肺脏不复制;反之,以的基因和蛞黄鹛婊粃腜蚝蚆基因,结果使得疐能感染小鼠,在肺脏的病毒滴度达到了辍J匝橹っ鱂蛕孕∈感染能力是由蚉蚬餐跋斓摹为了更深入的研究两毒株的致病机理,我们分析了和的和的氨基酸序列,结果发现基因有霭被岵煌琍蛴个氨基酸不同。为了确定在感染小鼠时,具体是的哪一个氨基酸起作用,我们对的两个位点进行点突变,救获鐾槐洳《尽M槐洳《径孕∈蟮母腥窘峁⑾郑篜话基酸由湮猇后,可使得谛∈蠓卧嘀懈粗颇芰档倍。反之,的位氨基酸由湮狪后,可使得孕∈笥刹桓腥颈湮A烁腥尽位氨基酸的改变并没有影响病毒致病性。结果证明基因的位氨基酸影响着和对小鼠感染能力。本实验利用反向遗传操作技术和定点突变技术,发现基因的位氨基酸和基因的位氨基酸共同影响了和对小鼠感染能力。关键词:猪流感病毒;;环聪蛞糯
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插图和附表清单土鞲胁《窘峁雇肌滴鼻感染野生病毒及其亲本救获病毒小鼠体重变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯滴鼻以及单基因替换救获病毒后小鼠体重变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯鼻腔滴注及单基因替换救获病毒感染后小鼠存活情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯滴鼻及单基因替换救获病毒感染后小鼠存活情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯以为背景救获病毒基因组成及其对小鼠的致病性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..以刁为背景救获病毒基因组成及其对小鼠的致病性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。感染救获突变病毒小鼠体重变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.图感染突变病毒小鼠存活情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..表流感病毒全长基因组的扩增引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。基因进行突变的引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.两株试验病毒对小鼠致病性差异⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一两株亚型流感病毒和刁氮基酸差异⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..救获亲本毒与单基因替换重组病毒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。救获病毒的峁腥疽吧《綟爸刈椴《镜男∈蠓卧嗖《镜味ń峁腥疽吧《镜髈爸刈椴《镜男∈蠓卧嗖《镜味ń峁和槐洳《揪然癖怼突变病毒的突变病毒感染组织后病毒滴定结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
期:.:./..,。耋￡,殴期:呈:∑查导师指导研究生学位论文的承诺内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说申请学位论实之处:。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,:本人承诺:我的研究生所呈交的学位论文是在我指导下独立开展研究工作及取得的研究结果,属于我现任岗位职务工作的结果,并严格按照国家及学校有关学术道德规范的规定要求而获得的研究结果。如果违反,我必须接受按国家及学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任。指导教师签名:本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定,即:研古农业大学,且导师为通讯作者,,允许论文