文档介绍：中国农业科学院
博士学位论文
H1N2、H3N2及H5N1亚型猪流感病毒进化及致病性研究
姓名:许传田
申请学位级别:博士
专业:预防兽医学
指导教师:陈化兰
20080601
捅要率%份琀絴生率%份V肀鞘米友吠苯又諱蚐鸡胚进行猪流感是引起猪的高度接触性病毒病,对感染备群造成巨人的经济损失。⒕哂兄匾5墓ü卫生意义。猪流感病原主要包括,,等弧型土鞲胁《尽V碜魑A鞲胁《镜中间宿主,具有混合器作州,人、禽流感病毒可以在其体内重组产生新病毒。开展猪流感流行病学检测及致病分离株的演化规律具有重要意义。本研究先后在上海、河南、山尔、湖北、江苏、广东等省市采集猪鼻拭子份和血清份。血清样品检测结果如下:性率%,蹋月份琀骾性病毒分离,共分离剑闔株利闔鞲胁《尽=峁砻鞯鼻拔夜煌区猪群中普遍存在和亚型猪流感流行。为了解我国猪流感病毒分子进化变异情况,本研究挑选代表毒株疓/雨代表毒株疓/进行基冈组测定分析。结果表明赡苊自炊。泵乐砣褐辛餍械腍⌒讨砹感病毒:而赡苣苊自炊。诒泵廊巳褐辛餍械腍「チ鞲胁《尽7直鸫亮縃黮分离病毒对、、、抗体皆为阴性的日龄仔猪进行感染实验,结果是感染斤第、艽又肀鞘米又兄匦路掷虢闕病毒,其中第病毒含鼍最高:其它脏器没有分离剑病毒。临床症状轻微,没有猪只死亡。结果表明单纯或流感病毒能在不引起临床症状的情况下感染易感猪只,这说明我国流行的和流感病毒对猪致病性不强。为阐明⌒椭砹鞲胁《究缰执úヒ糯ɑ。狙芯可秆∫糯ü叵迪嘟整个基冈组只有个氨基酸筹异孕∈蟾腥灸芰ν耆ú煌牡牧街闔蛐土鞲胁《疚DP筒《荆///,对小鼠完全不感染:疐疘/孕∈笥兄虏⌒郧乙鹦鼠死亡。建立了虳姆聪蛞糯ú僮飨低常直鹨訤和为背景,利用反向遗传技术在细胞上救获单基冈替换重组的个病毒。这些病毒分别以剂鼙鼻腔感染小鼠,结果发现:的和苑直鹛婊籉相应基冈,使在小鼠肺脏感染能力降低’倍《镜味由原米的湮.;反之腜蚆基因分别替换的相应基因,使闹虏⌒杂刹桓腥颈湮8腥肺脏病毒滴定结果为.。其它单基因替换重组病毒没有改变这两株病毒对小鼠感染能力。结果表明蚉蛴跋霧和在小鼠肺脏中的复制能力。为进一步确定和匀绾斡跋於訤利对小鼠感染能力,我们把蚉礁基因同时替换,发现以的和婊籉的和院螅筊疍荒在小鼠肺脏中复制:反之,以腜蚆替换的和院螅贾翿/能感染小鼠并在肺脏中复制,病毒滴度达剑=峁砻鱉和基因协同作用影响虳孕∈蟾腥灸芰Α在此基础上,我们分析虳街瓴《镜腜蚆基冈氨基酸,发现,和基因分别有龊个位点氨基酸不同。为进一步确定和的哪一个位点氨基酸对小鼠感染能力起作,分别对和的两个位点进行点突变,利川反向遗传操作系统救获龅阃槐洳《尽M槐洳《径孕∈蟾腥窘峁⑾郑篜位由湮猇墒筊谛
猪群中主要流行川币¨弧型流感毒株,而且和早普遍感染状态:川和可能鼠肺脏中复制能力降低五倍由原米的湮.,反之,挥蒝变为可使孕∈笥刹桓腥颈湮8腥肺脏病毒滴定结果为.:同样,挥蒘变为可以使腥拘∈.。但是的,话被岬母谋涿挥杏跋觳《局虏⌒浴结果表明基因的位和基因的位氨基酸协同作用影响虳孕∈蟾腥灸芰Α本研究系统研究了中国部分地区猪流感病毒流行的弧型和生物学特性,结果表明::虷鞲胁《可以住不引起临床症状情况‘卜感染猪并且病毒能在上呼吸道中人鼙复制,这对阐明猪流感病毒感染致病机制具有一定的理论意义,同时对猪流感临床诊断具有一定的现实指导作用。利川反向遗传操作和定点突变技术发现的位和的位氨基酸协同影响鸇孕∈蟾腥能力,这为阐明弧型流感病毒跨种间传姆肿右糯ɑ铺峁┲匾5睦砺酆褪笛橐谰荨8此本研究具有重要的兽医指导意义和重要的人类公共卫生意义。关键词:猪流感病毒,::遗传演化:,跨种传橘
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滔伎、,习时间:汐纷多月独创性声明关于论文使用授权的声明/多月湍痧月护∥年C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式