文档介绍：中国医科大学
硕士学位论文
PD98059对HL60细胞Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导影响的研究
姓名:宋广玉
申请学位级别:硕士
专业:内科学
指导教师:李艳
20090401
訦赴鸕./瓻信号转导影响的研究目的·中文论著摘要·刖急性早幼粒细胞白血病,亦称急性髓细目前研究显示,%的颊呦赴糯в刑匾煨詔;,导致号染色体上早幼粒白血病基因湃旧迳系腞基因姿崾芴寤形成甊融合基因,这是⒉〉墓丶疲但并非是唯一机制。近来研究表明猂;蛐∈笸狈⑸鶩一种Ⅲ型酪氨酸蛋白激酶型受体槐淇梢缘贾滦∈罂焖俜⑸鶤,提示引/.,丝裂原活化细胞外调节激酶,细胞外信号调节激酶藕抛5纪径的异常在⑸幸财鸬街匾W饔谩狹./藕磐揪妒且桓鲂结合蛋白连接活化的受体酩氨酸激酶和胞浆蛋白激酶级联反应,在多种肿瘤组织与细胞中检测到该途径的异常活化。且恢諱匾煨砸种萍粒芄惶匾煨宰瓒螮激酶对/牧姿峄罨贾翯疓谧柚停俳赴蛲觥<诖耍颐且急性早幼粒细胞白血病细胞株为研究对象,探讨訦赴号转导的影响及其作用机制,以期为白血病的基础研究和临床治疗探寻一条新途探讨抑制剂约毙栽缬琢O赴籽2∠赴闔赴/瓻信号转导以及细胞增殖的影响。吾胞白血病,型,约占成人%。./径。.
收集对数生长期的细胞,无血清培养液培养×恤接种于材料和方法一、细胞系二、试剂三、试验方法⑾赴嘌法测定细胞生长的抑制情况⒘魇较赴跫觳庀赴蛲龊拖赴芷攵縍ḿ觳釫基因表达水平细胞,由中国医科大学遗传实验室惠赠鹤訮公司;购自荆惶ヅQG骞鹤灾国医学科学院工程研究所;二甲基亚砜、四甲基偶氮唑蓝⒌化丙锭均购自荆籑—硭细胞采用含%胎牛血清的培养液,在℃、、饱和湿度的培养箱中培养:每灰阂淮巍孔培养板,每孔,然后加入不同浓度的蛊渲张ǘ仍细胞中依次为/嘌、;向每孔加入芤,避光培养后,胄,弃上清,每孔加入.,震荡均匀后酶标仪上测定波长处吸光度怠对数生长期的细胞,无血清培养液培养/接种于培养瓶,每瓶煌ǘ鹊腜处理细胞,其终浓度分别为疞,培养后,收集个细胞至离心管,离心,だ銹洗涤危%乙醇固定过夜,吹次,流式细胞术检测凋亡、/期细胞的比率。、均购自公司;引物由公司合成。芄馊旧,、狪
实验数据用黜表示,、訦赴鸈砌基因表达影响讨论四、统计学处理结果一、饔肏赴笙赴纳で榭二、訦赴蛲龊拖赴芷诘挠跋每瓶,不同浓度的硐赴渲张ǘ确直鹞、、、/培养螅占赴琓禾崛∠赴躌,将ǘ鹊髡/,逆转录成,加入不同引物后进行┰觯魑D诓危┰霾锞×染色后デ碇悄旱缬荆醮贤庀陨ü饷芏壬瑁攵訦赴び幸种谱饔茫琍浓度为疞时,随着间相同时,随着饔门ǘ鹊脑黾拥蛲鲆嘣黾;饔随着ǘ鹊脑黾樱琀赴鸈虮泶锼较陆担琾/瓻信号转导系统是最近十几年才开始研究的,与细胞的生长、增殖、分化等过程的调节以及肿瘤的发生有着密切的关系。量检测、、虮泶锼降母谋洹作用时间的延长,其对细胞的抑制作用增强,但差异无统计学意义,ǘ任/,作用,,与对照组比较差异显著,并且浓度相同时,随着饔檬奔涞难映さ蛲鲈黾樱饔檬细胞蔽捶⑸飨缘腉疓谧柚停后/期阻滞明显增强表达增加,差异具有显著性..
无论是正常细胞还是肿瘤细胞,/瓻信号途径均能促进细胞由/期进入凇Q芯糠⑾郑琑./藕磐揪都せ詈蠹瓤梢酝等分子的表达来调控细胞的凋亡,亦可、、等的表达,促进细胞从/期进入冢佣骺叵赴芷诮獭且恢諱匾煨砸种萍粒芄蛔瓒螹訣的磷酸化活化,阻碍细胞外刺激信号转导至赴捌浜四冢佣跋煜赴脑鲋场⒎化、凋亡等一系列生物学效应。/募せ钅芄坏鹘诎籽2∠赴脑鲋澈蜕妫芯肯允荆诖蠖嗍踔颊咧蠷./低潮患せ睿⑶矣朐ず笥泄亍甇等发现芄患跎賑、、的表达,同时增加、谋泶铮贾掳籽2赴⑸鶪谧柚停蠹亮康腜能够引起细胞凋亡。在姆⑸⒄怪校琑./藕畔低秤隒家族的叵笛芯拷贤赋梗猛揪队雙之间的关系报道较少。本实验中将饔糜诎籽2∠赴礖赴晒鄄斓矫飨缘南赴生长抑制现象,结果显示,随着ǘ仍黾踊蜃饔檬奔涞难映ぃ赴囊制率增加;芄皇笻赴⑸鶪疓谧柚停盏枷赴蛲觯俗用具有剂量依赖性与时间依赖性,与文献报道一致。,谙喙氐鞍谋泶铮俳鴓的泛素化降解,从而促进白血病细胞增殖,说明/瓻信号途径能够调节牡鞍妆泶铮槐臼笛榻峁允綪作用于细胞后,表达减少,同时其下游分子的表达减少,谋泶镌黾樱得鱏魑猂./藕途径的下游分子受其调控,进而调节谋泶铮鹘谙赴芷诮獭实验中,我们观察到,訦赴鲋车囊种谱饔盟孀排ǘ鹊纳高而增强,表现出浓度依赖性。但是⒉荒芡耆种艸赴脑鲋场即使疞饔,细胞抑制率也未能达到%。说明在⒉过调节以调节细胞周期相关因子等报道指出/瓻信号途径是通过增加甅./纷柚停珽、、.
论关键词结中,/瓻通路异常只是其中的一个发病机制,其他因素如染色体救诤匣也